药物体外抗菌试验
药物体外抗菌试验是在体外测定微生物对药物敏感程度的试验，是筛选抗菌药物或测试新药抗菌性能的重要环节，现已广泛地应用于新药研究和指导临床用药。如抗菌药物的筛选、提取过程的生物追踪、抗菌谱、耐药谱、药敏试验、药物血浓度测定等各个方面。抗菌试验包括抑菌试验和杀菌试验。抑菌即抑制微生物的生长繁殖，但不能杀死微生物，在药物除去后微生物又能生长；杀菌即能杀死微生物，当药物除去后，微生物也不能再生长繁殖。两者并非绝对，只是在一定条件下相对而言。常用的方法有琼脂扩散法和连续稀释法。
（一）琼脂扩散法
琼脂扩散法是利用药物可以在琼脂培养基中扩散的特点，在药物有效浓度的范围内形成抑菌圈，以抑菌圈直径的大小来评价药物抗菌作用的强弱或了解细菌对药物的敏感程度。主要方法包括纸片法、挖沟法、管碟法等。
1.纸片法 经世界卫生组织推荐，目前各国广泛采用的方法是标准纸片琼脂扩散法（图41-1），它是由Bauer和Kirby所创建，故又称K-B法。该法是将含有定量抗菌药物纸片（药敏纸片）贴在已接种细菌的琼脂平板上，抗菌药物通过纸片在琼脂内向四周呈梯度递减扩散，使纸片周围一定距离范围内试验细菌的生长受到抑制，形成抑菌环。因同一细菌对不同抗生素的敏感性不同，因而抑菌环的大小不一。测量抑菌环的直径，根据临床和实验室标准机构（CLSI）提供的MIC（最小抑菌浓度）解释标准判断待检菌对被测药物的敏感程度。该方法属定性试验，可用于选择敏感药物及评估药物的抗菌谱。其优点是方法简单易行、价格便宜、药物选择性灵活，适用于生长快的需氧和兼性厌氧菌进行药敏试验，是药敏试验中最成熟的方法之一。缺点是该方法操作时影响因素较多，需注意控制。
2.挖沟法 先制备琼脂平板，在平板上挖沟，沟边垂直画线接种各种试验菌，再在沟内加入药液。培养后根据沟两边所生长的试验菌离沟的抑菌距离来判断药物对这些菌的抗菌效力。适用于在一个平板上试验一种药物对几种试验菌的抗菌作用。
图41-1 纸片法药敏试验
3.管碟法 将管状小杯放置平皿菌层上，加入一定量药液（药液与杯面平为准）。置37℃温箱中培养16～24小时后，测定抑菌圈直径的大小，计算细菌对药物的敏感程度。管碟法常用于测定体液药物浓度或体内组织浓度。
通过上述方法，根据抑菌圈直径大小可确定细菌对药物的敏感性，但不能确定药物的最小抑菌浓度。临床上常用纸片法来判断待测细菌对药物敏感程度，检测结果采用三级划分制（即敏感、中度敏感、耐药）。纸片法主要用于新药抗菌能力、抑菌范围研究，抗生素发酵过程中效价单位测定，也用于检测体内的血药浓度或其他体液浓度；管碟法和挖沟法用于抗生素、中药等新药研究。(https://www.daowen.com)
（二）连续稀释法
连续稀释法可用于测定药物的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）。
1.试管稀释法 在一系列试管中，用液体培养基对抗菌药物进行倍比稀释（见图41-2），获得药物浓度递减的系列试管，然后在每一管中加入定量的试验菌，经培养一定时间后，肉眼观察试管混浊情况，记录能抑制试验菌生长的最低抑菌浓度。此种方法由于细菌与药液接触，比其他方法更为敏感，可作为筛选抗生素、无深色中草药制剂抗菌作用的研究。
图41-2 试管稀释法
2.平板稀释法 平板法可同时测定大批试验菌株对同一药物的MIC，且不受药物颜色及浑浊度的影响，适于中药制剂或评定新药的药效学（药物的体外抗菌活性测定）试验。其方法是先按连续稀释法配制药物，将不同系列浓度、定量的药物分别混入琼脂培养基，制成一批药物浓度呈系列递减的平板。然后将含有一定细胞数的试验菌液以点种法接种于平板上，可以逐个点种，也可采用多点接种器接种；同时设无药空白平板对照。培养后可测定各菌对该药的MIC。