实训18 鸡新城疫和传染性法氏囊病卵黄抗体的制备
一、仪器及材料
（1）新城疫灭活油佐剂苗。
（2）患传染性法氏囊炎的法氏囊组织。
（3）传染性法氏囊炎弱毒苗。
（4）健康产卵鸡群。
（5）新城疫血凝抗原。
（6）传染性法氏囊炎琼扩抗原。
（7）其他。
二、方法与步骤
（1）传染性法氏囊炎组织灭活苗的制备。将有病变的法氏囊组织称重，以组织捣碎器捣成匀浆，按1∶5（重量∶体积）加灭菌生理盐水继续捣匀，然后用5 层灭菌纱布过滤，加入0.3%的甲醛，混匀，37 ℃放置24 h，中间振荡数次。灭活后，以常规培养基进行杂菌检查，以小白鼠进行安全检查，合格后，置阴凉处备用。
（2）传染性法氏囊炎灭活油佐剂组织苗的制备。将10 号白油按2%加硬脂酸铝粉和6%的司盘-80 混合加热融化后，分装保存。灭活组织液以4%比例加入吐温-80，以油相∶水相=3∶1的剂量制成灭活油佐剂组织苗。先将油相搅拌起来，逐渐加入水相，充分搅拌即可。
（3）选取健康无主要传染病，特别是无鸡白痢、沙门氏菌病的高产鸡群。
（4）将鸡新城疫灭活油佐剂苗与传染性法氏囊炎灭活油佐剂组织苗等量混合，给每只鸡皮下注射2 mL。
（5）14 天后，从鸡翅静脉采血，采集血清做鸡新城疫血凝抑制试验和传染性法氏囊琼脂扩散试验。血凝抑制价平均达到1∶2 084，琼扩效价达到1∶16 以上，即为合格。如不合格，可继续重复步骤（4）。
（6）效价合格，收获鸡蛋。
（7）将鸡蛋水洗后，浸入0.50%石炭酸水中消毒半小时，捞出后，置无菌室紫外线照射20 min。无菌操作去蛋皮，收取卵黄，按1∶1加入灭菌的含1%石炭酸生理盐水，搅拌，以两层纱布过滤，滤液即为鸡新城疫和传染性法氏囊炎二联高免卵黄抗体。
（8）4～8 ℃保存备用。
三、实验结果
（1）物理性状。呈均一的橙黄色带胶状的液体，放置一定时间，下沉多量的黄白色絮状沉淀，摇匀后，仍呈均一黄色或淡白色液体。
（2）效价。新城疫血凝抑制价应大于1 024 ×，传染性法氏囊炎琼扩效价应大于8 ×。
（3）安全检查。取3～5 mL 卵黄液一次皮下注射小白鼠或雏鸡，无任何影响。
（4）杂菌检查。应无菌生长。
（5）效力检查。对典型的新城疫病鸡和传染性法氏囊炎病鸡，肌内或皮下注射1 mL，3天内应有80%以上明显好转或痊愈。