3.6 血液病精准分析的高手—流式细胞术
疾病的治疗讲究对症下药，而对症下药的前提就是明确诊断。血液病的诊断，通用国际上的MICM（形态学、免疫学、遗传学及分子生物学）进行综合分析。
形态学检查
抽取少量的骨髓液，涂成薄片经过染色后，通过光学显微镜观察细胞的形态并对其进行细胞分类计数，从而协助初步诊断血液病、观察疗效及判断预后。
在骨髓中，由于正常细胞形态多样，不同疾病也可出现多种多样的细胞形态变化，那要是遇到长得差不多，傻傻分不清楚，要怎么辨认呢？
正如双胞胎也不是完全一样的，看身体某些部位有没有胎记，脸上有没有痣，还是可以区别谁是老大谁是老二。
免疫学检查
为进一步识别显微镜下看上去一模一样的细胞，因此要进行免疫学检查，其主要针对的是检查细胞表面/细胞内的标志物，就像人的胎记一样，不同的是，人的胎记很少（一个人可能就一两个），而细胞的标志物有很多。
我们管这些表面标志物叫“抗原”，一般用“CD”表示，抗原的种类繁多，研究人员为了区分它们，为它们进行了编号加以区分：CD1、CD2、CD3……不同的细胞表面还会有多种不同的抗原。
比如：B淋巴细胞表面有CD10、CD19、CD20、CD38……T淋巴细胞表面有CD2、CD7、CD4、CD8……自然杀伤细胞表面有CD16、CD56、CD11a……（图3.11）。
图3.11 B淋巴细胞、T淋巴细胞、NK细胞(https://www.daowen.com)
那我们就可以通过流式细胞术分析细胞表面抗原的类型（CD分子等）来确定是哪一种细胞及数量，从而确定是哪一种类型的血液病。
接下来看看我们是怎样对不同类型的细胞进行精准分析的。
首先，试探性地加入偶联荧光素的抗体，如果细胞有表达这种抗原，抗体就会和抗原结合，给不同的细胞标记上不同的荧光素（红的、绿的、蓝的、黄的）。然后，做完标记的细胞逐个排队通过流式细胞仪的激光；若细胞结合上荧光素，就能显出它们各自的荧光，这种信号就被流式细胞仪采集到，最后，通过软件分析这些细胞表达的“胎记”，显示成由不同参数构成的流式图，就能知道血液里面有哪些细胞啦！
流式细胞术检测在临床血液学检验中的应用：
①白血病、淋巴肿瘤免疫分型：应用多参数流式细胞分析检测细胞膜或细胞质内的抗原，可短时间分析大量细胞，并可帮助识别显微镜下形态学相同或相似的细胞。对鉴别白血病、良恶性淋巴瘤细胞及治疗后微小残留病（MRD）检测具有重要意义。
②嵌合抗原受体基因修饰T细胞（chimeric antigen receptormodified T cells，CAR-T）治疗监测：流式细胞术用于监控CAR-T细胞群的组成及效应功能分析（如CD27+CD45RO-CD8+T细胞的比例升高，与抗CD19 CAR-T细胞治疗的慢性淋巴细胞白血病患者的持续缓解相关），即可评估体内细胞的持久性和治疗效果。
③造血免疫细胞亚群及功能和细胞因子测定：能反映机体当前免疫功能的状态水平，对观察某些疾病（移植排斥反应、超敏反应、肿瘤、肾炎、感染、自身免疫病、AIDS等）诊治疗效及预后有重要意义。
④造血干/祖细胞计数：在造血干细胞移植过程中，准确的CD34阳性细胞计数对外周血造血干细胞的动员、采集、处理及回输和移植后的监测有极大的价值，是判断移植是否成功的有效指标。
⑤红细胞、血小板流式分析：核酸染料派诺宁γ标记，可测定网织红细胞中的RNA，计算的成熟指数对判断骨髓红细胞造血功能有重要意义；红细胞CD55/CD59表达水平分析，能特异地诊断及监测阵发性血红蛋白尿（PNH），其灵敏度和特异性均优于手工的溶血实验。血小板的活化及功能状态的监测与评估，对疾病的辅助诊断、治疗、预防及发病机制的研究具有重要的临床价值。
⑥其他临床研究分析：HLA-B27分析，可为自身免疫性疾病（结缔组织病、强直性脊柱炎等）诊断提供参考依据。异体器官移植术后排斥反应的监测，CD4+T细胞数量、CD8+T细胞中CD38分子数量的增多对AIDS的诊断及治疗有重要的意义。
（作者：李 艺）