间接红细胞凝集试验
（一）原理
该方法属于免疫凝集反应，目前应用最多的是检测受检者血清或血浆中抗日本血吸虫虫卵可溶性抗原（soluble egg antigen，SEA）的特异性抗体。将SEA包被于红细胞表面，成为致敏的载体，然后与相应的抗体结合，通过抗体桥联，出现肉眼可见的凝集现象，以检测样本中的相应抗体。最常用的红细胞为健康人O型红细胞。
（二）试剂与器材
1.试剂 间接血凝检测血吸虫抗体试剂盒（市售），内有冻干致敏红细胞、阳性参考品、阴性参考品、稀释液。
2.耗材 96孔V型有机玻璃反应板、10～100μl可调节移液器、100～1 000μl移液器、移液吸头（1 ml和200μl）。
3.设备 台式低速离心机、平板微量振荡器、恒温箱。
（三）血样采集
静脉末梢采血100μl或静脉采血2 ml，室温放置2小时后，2 500转/分钟离心5分钟，分离血清后待检。
（四）操作方法
1.样本编号 血清样本从左到右依次排列，并进行登记。
2.阴、阳对照稀释 阴性、阳性对照冻干品各加100μl稀释液，使其充分溶解，移液器吹打数次混匀后备用。
3.样本稀释 取血凝反应板，横向平放纵向使用。于第1列第1孔加稀释液100μl，第1列的第3、4孔各加稀释液25μl，第2孔不加稀释液。操作完成后再于第1孔加1号待测样本25μl，充分混匀后吸出25μl至第2孔，再从第1孔吸出25μl至第3孔，充分混匀后吸出25μl至第4孔，充分混匀后吸出25μl弃去。同上操作，依次进行第2～n号样本、阴性对照血清、阳性对照血清的倍比稀释，血凝反应板纵向4孔的血清稀释度依次为1∶5、1∶5、1∶10、1∶20（多样本操作时，可预先加入稀释液后再进行血清稀释）。
4.致敏红细胞稀释 每支冻干致敏红细胞加1 ml稀释液，充分混匀后备用。配置好的红细胞悬液临用前需充分混匀，多样本操作时需在加悬液过程中不时混匀悬液，以免悬液中的红细胞沉底而影响结果的准确性。
5.加液及温浴 除每列第1孔血清稀释孔外，其余血清稀释孔各加致敏红细胞悬液25μl，操作结束后将血凝反应板置微量振荡器震摇1～2分钟，以盖板封板并置37℃电热恒温水浴箱30分钟。实验台垫上白纸，在白色背景下观察结果并记录。
（五）结果判读
阴性对照血清不出现凝集现象，阳性对照血清出现凝集现象，检测结果视为有效。(https://www.daowen.com)
以呈“＋”或以上反应强度凝集的血清最高稀释度作为血清的效价，以效价≥1∶10作为阳性判断标准。
（六）结果判读标准
1.阴性反应 红细胞全部下沉在孔底，形成紧密、边缘光滑的小圆点。以“－”表示反应强度。
2.阳性反应 红细胞出现程度不同的凝集反应。以“＋”“＋＋”和“＋＋＋”表示反应强度（图5-3）。
（1）＋：红细胞大部分沉积于孔底，形成一圆点，周围有少量凝集的红细胞，肉眼见周边模糊（或中间出现较为明显的空白点）。
（2）＋＋：红细胞多数在孔底周围形成薄层凝集，孔底中心可见少量红细胞下沉的小圆点。
（3）＋＋＋：红细胞形成薄层凝集，布满整个孔底，边缘呈现不规则的皱褶。
图5-3 不同反应强度凝集模式图
（七）诊断意义
主要用于血吸虫病辅助诊断，不能作为确诊依据。可用于对血吸虫病人的筛查，需结合疫水接触史、临床症状和病原学检查等结果综合分析。
（八）注意事项
（1）各公司提供的间接血凝试验产品具体操作细节和注意事项略有不同，检测前可阅读试剂盒随附的使用说明书，并据以操作。
（2）待检血清应避免溶血，密封保存于2～8℃可稳定7天。
（3）不同血清样品变换时应更换移液吸头，防止交叉污染。
（4）检测结束后，将血凝反应板浸泡于1∶200稀释的84消毒液中30分钟，后将血凝反应板置冲板器中冲洗（禁用毛刷刷洗），甩干后放入干燥箱中烘干备用。
