酶联免疫吸附试验
（一）原理
该方法是将抗原和抗体的免疫反应和酶催化反应相结合的一种检测技术。把标记的抗原或者抗体与包被于固相载体（聚苯乙烯微量反应板）的配体结合，再使之与相应的底物作用而显示颜色，根据颜色反应或者用酶标仪测定OD值判定结果。目前市售的血吸虫酶联免疫吸附试验试剂盒常用的是间接酶联免疫吸附试验，即用包被于固相载体的血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）、组分抗原或重组抗原等检测抗血吸虫特异性抗体。
（二）试剂与器材
1.试剂
（1）酶标二抗：辣根过氧化物酶标记的抗人第二抗体（酶结合物）或辣根过氧化物酶标记的A蛋白或辣根过氧化物酶标记的G蛋白。
（2）包被液：0.05 M碳酸盐缓冲液（pH9.6）。
（3）洗涤/稀释液：0.01 M磷酸缓冲液/0.05％吐温-20（PBS-T，pH7.4）。
（4）显色液（含底物）：邻苯二胺（OPD）或3，3′，4，4′四甲基联苯胺（TMB）溶液10 ml，加30％过氧化氢（H2O2）50μl。
（5）反应终止液：2 M硫酸（H2SO4）。
（6）阴性参考品、阳性参考品。
2.耗材 96孔微量反应板（聚苯乙烯或聚氯乙烯微量反应板）、100～1 000μl移液器、1～10μl移液器、移液吸头（10μl、200μl和1 ml）。
3.设备 恒温箱或恒温水浴箱、ELISA检测酶标仪、洗板仪。
（三）操作方法
1.抗原包被 于96孔微量反应板凹孔中加入100μl以包被液作稀释的虫卵可溶性抗原SEA（稀释倍数依抗原浓度而定，一般稀释至5～10μg/ml蛋白质）或其他抗原，用保鲜膜包好，或置于湿盒中，放置4℃过夜。次日倾去抗原，用洗涤液洗涤3次，每次5分钟，最后一次洗后于纸巾上拍干。亦可用洗板仪按仪器说明洗涤。
2.封闭 于凹孔中加入以PBST稀释的牛血清白蛋白（BSA）150～200μl，置湿盒内，37℃，1小时，如上洗涤。
3.加样 于凹孔中加入以PBS-T作1∶100或1∶200稀释的受检者血清及参考血清100μl，置湿盒内，37℃，1小时。每批检测设1个阴性对照和1个阳性对照，倾去血清，以PBS-T洗涤3次，每次5分钟，每次洗后于纸巾上拍干。
4.加入酶结合物 加入以PBS-T作1∶1 000～1∶4 000稀释的酶结合物100μl（稀释倍数按照酶结合物的效价而定），置湿盒内，37℃，1小时。倾去酶结合物，以PBS-T洗涤3次，每次5分钟，最后一次洗后于纸巾上拍干。(https://www.daowen.com)
5.显色 加入100μl显色液（含底物，OPD或TMB），37℃，15～30分钟。
6.终止反应 在各孔中加入终止液50μl（2 M H2SO4），终止反应。
7.测定吸光值 在酶标专用测定仪上读取492 nm（底物为OPD）或450 nm（底物含TMB）光密度（OD）值。
（四）结果判读
在酶标仪上读取492 nm（OPD为底物）或450 nm（TMB为底物）光密度（OD）值，当标准阳性血清OD值与标准阴性血清OD值之比≥2.1（或试剂盒指定的判定阈值）时，试验成立，否则须重新测定。
（1）阳性反应：检测血样的OD值（S）和标准阴性对照孔的OD值（N）的比值≥2.1判为阳性。
（2）阴性反应：检测血样的OD值（S）和标准阴性对照孔的OD值（N）的比值＜2.1倍判为阴性。
（3）无效：标准阳性血清OD值与标准阴性血清OD值之比＜2.1（或试剂盒指定的判定阈值）。
（五）诊断意义
在血吸虫病流行区，可用于血吸虫病辅助诊断、流行区人群过筛和综合查病。阳性者必须经过病原学检测技术检测方可确诊。
（六）注意事项
（1）各家市售试剂盒在操作细节上可能存在不同，使用前仔细阅读说明书，并据以操作。
（2）检测时，每块反应板均应设标准参考阳性血清及阴性血清对照。
（3）检测时，加底物前，反应板经洗涤、甩干后，不宜在空气中暴露过久，应速加底物，以免影响酶的活力，影响结果。
（4）测定OD值时注意擦干反应板底部的小水珠。
