C1酶的纯度鉴定

2.C 1酶的纯度鉴定

（1）醋酸纤维素薄膜电泳：C1酶成单一蛋白带（见图5）。

图5　C1酶的醋酸纤维素薄膜电泳

电流0.5毫安/厘米，加样量50 μg，电泳时间30分钟。

（2）聚丙烯酰胺凝胶电泳：C1酶为单一蛋白带（见图6），只能测到C1酶活力。

（3）免疫电泳：纤维素酶的抗血清与C1、Cx或β-葡萄糖苷酶均能起沉淀反应，并且纤维素酶三个组分的活力均受抗血清不同程度的抑制（见图7），证实纤维素酶的抗血清确实有抗体活力。混合酶的免疫电泳呈三条弧线，而C1酶的免疫电泳只出现一条沉淀弧线（见图8）。

图6　C1酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳

加样量500 μg；胶浓7%；电流4毫安/管；电泳时间2.5小时。

图7　纤维素酶抗血清对C1、Cx和β-葡萄糖苷酶的抑制作用

图8　C1酶和纤维素酶混合酶的免疫电泳

琼脂糖浓度1.2%；电压5伏/cm；电泳时间3小时。电泳后，中央开槽，滴入纤维素酶抗血清50 ul。室温下扩散24小时，氨基黑染色，干燥保存。

图9　C1酶的超离心图

C1酶的浓度10 mg/ml、0.1 mol/L、pH 4.5醋酸缓冲液；转速48 000转/分。

（4）超离心：C1酶的超离心图谱是呈单一对称峰（见图9），说明C1酶是超离心纯的。