三、讨论

纤维素酶是复合酶。Reese（1950）提出了C1-Cx酶的作用假说以后，不少研究人员分离了C1酶，并研究其性质（Selby等，1967；Halliwell等，1973；Wood，1968；Wood等，1972）。但是，对于C1酶的作用，争论较多（朱雨生，1978）。近来，不少研究人员认为，纤维素酶分解天然纤维不是像Reese所假设的那样，先由C1酶作用，后由Cx酶作用，而是Cx酶先作用，提供可反应的链端，再由C1酶作用，分解产生纤维二糖。Cx酶是内切型β-1，4-葡聚糖酶，而C1酶是外切型β-1，4-葡聚糖纤维二糖水解酶（Wood等，1972；Wood，1975；Halliwell等，1973）。中国科学院微生物研究所纤维素酶组从绿色木霉中分离纯化到C1酶，并对C1酶作用方式持类似的观点（1976）。Tomita（1974）则提出天然纤维素的分解是靠随机性较大的CMC酶和随机性较小的微晶纤维素酶协同作用的结果。一般从木霉在复杂的培养基中以天然纤维素（如稻草粉、麸皮等）为碳源作长时间培养所得的滤液中得到的纤维素酶成分较复杂，杂蛋白较多。本工作采用木霉洗涤菌丝体以槐糖诱导的方法得到的胞外纤维素酶成分较单纯（见图1），为进一步分离纯化可能带来方便。

拟康氏木霉纤维素酶主要通过DEAE-Sephadex A-50、Sephadex G-100、凝胶电泳和选择性失活的方法，初步将C1酶、Cx酶和β-葡萄糖苷酶分开。尤其是C1酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫电泳，以及超离心均证明是均一的组分，其含量在三个组分中占绝对优势。氨基酸成分分析证明酸性氨基酸占优势，此结果与Tomita等（1974）的报告类似。苏氨酸和丝氨酸含量高可能与多糖水解活性有关。纤维素酶三个组分一旦分开，分解天然纤维素或变性纤维素的能力便大大下降，重组后活力可恢复，相互间（主要是C1与Cx酶之间）表现出协同效应，此结果与其他研究者在绿色木霉和康氏木霉中发现的一致（Selby等，1967；Wood等，1972）。在我们试验中，根据凝胶电泳和凝胶过滤等看来，Cx酶可能不止一个成分。最近，Wood等（1977）报道，采用高分辨力的等电焦聚法等，从康氏木霉的纤维素酶中进一步得到二种C1酶、六种Cx酶和二种β-葡萄糖苷酶，其中只有二种Cx酶和C1酶之间有协同效应。本试验中C1酶作用的主要产物是纤维二糖，看来也是支持C1酶基本上是外切型β-1，4-葡聚糖纤维二糖水解酶的，但由于产物中尚有少量葡萄糖，所以也许是一种随机性较小的外切酶。(https://www.daowen.com)