三、核酸的提取
分离提取核酸的方法是:先破碎细胞,提取核蛋白;再使核酸与蛋白质分离;最后沉淀核酸,进行纯化。
(一)核蛋白的提取
在不同浓度的氯化钠溶液中,脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白的溶解度不同。脱氧核糖核蛋白易溶于1mol/L的氯化钠溶液,不溶于0.14mol/L的氯化钠溶液;而核糖核蛋白易溶于0.14mol/L的氯化钠溶液,不溶于1mol/L的氯化钠溶液。因此,可以利用不同浓度的氯化钠溶液将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白分别从破碎的细胞中分离出来。
(二)除去蛋白质(https://www.daowen.com)
核蛋白分离出来后,还需将其中的蛋白质除去。除去蛋白质的方法常用变性法,即利用蛋白质变性而沉淀将蛋白质除去。实验过程中选用的变性剂包括苯酚、三氯甲烷—戊醇混合液和十二烷基硫酸钠(SDS)。在提取过程中,还需加入柠檬酸钠或者硅藻土,作为核酸酶的抑制剂,以防止核酸的分解。
(三)核酸的纯化
由于核酸的种类比较多,因此往往采用不同的方法对不同的核酸进行纯化。常用的纯化方法有蔗糖密度梯度区带超离心法、超滤法、层析法、凝胶电泳法和凝胶过滤法。