LSCM的构造简介
LSCM 主要由5部分组成:显微光学系统、光源、扫描装置、检测器和应用软件系统。所有部件及部件之间的操作与切换均由计算机控制,可在计算机操作平台界面上灵活进行。
(一)显微光学系统
LSCM成像质量的核心部分是显微镜,也是共焦检测系统的常用组件。系统光路采用可以方便地在其中插入光学元件而不影响成像质量和测量精度的无限远光学系统结构。选取有利于荧光采集和成像清晰度的大数值孔径、平场复消色差物镜。由计算机控制物镜组的转换、滤色片组的选取、载物台的移动调节、焦平面的记忆锁定等。
(二)光源
LSCM的光源有2种激发光,荧光激发采用多色光(汞灯、氘灯、卤素灯等),激光激发采用单色性、穿透性、方向性好的激光光源。激光源可以使用提供发射波长为457nm、488nm和514nm蓝绿光的多谱线氩离子激光器、提供发射波长为543nm绿光的氦氖绿激光器和提供发射波长为633nm红光的氦氖红激光器。激光源还可以采用其他半导体激光器。
(三)扫描装置(https://www.daowen.com)
LSCM扫描装置是由具有XY平移扫描、阵镜摆动扫描等方式的丝杠导轨组成,是激光共聚焦检测系统进行大范围检测必需的组件。以XY平移扫描方式实现大范围区域的扫描,阵镜摆动扫描方式实现相对小范围、快速扫描,提高图像采集速度,有利于寿命短的离子的荧光检测。由计算机控制与信号采集相对应的扫描系统工作程序。
(四)检测器
LSCM扫描装置主要由检测器和转换器组成。光子计数器组成检测器、光电倍增管,分别完成信号检测和信号放大;转换器为高速A/D信号转换器,采集的信号通过高速A/D信号转换器输入计算机,完成图像重建和分析处理。光电倍增管前设置孔径可调针孔或固定孔径的小针孔,孔径大小变化由计算机软件控制。荧光检测光路中设置能自动切换的滤色片组,满足不同测量的需要;也可以采用光栅或棱镜分光,然后进行光谱扫描。
(五)应用软件系统
LSCM软件系统分为两部分:一是由扫描位置坐标与检测器接收的信号相对应、部件及部件之间的操作与切换、以图像的形式进行储存与显示的操作软件;二是应用软件系统,可以根据具体需要设置各种功能。