实验七　小白鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察

实验七　小白鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察

【实验目的】

（1）掌握小白鼠骨髓细胞染色体的制作方法。

（2）熟悉小白鼠染色体的形态和数目。

【实验准备】

1.材料 小白鼠。

2.仪器和器材 解剖剪、解剖镊、5 ml注射器、4号针头、10 ml刻度离心管、试管、毛细滴管、培养皿、冰水载玻片、托盘天平、恒温水浴箱、离心机、显微镜。

3.试剂 500 μg/ml秋水仙素、0.075 M氯化钾溶液、甲醇、冰醋酸、姬姆萨染液、香柏油。

【实验原理】

小鼠骨髓细胞具有旺盛的分裂能力。把秋水仙素溶液注射小鼠体内，破坏细胞分裂过程中纺锤体的形成，分裂细胞被阻截在中期。染色体（chromosome）是在细胞分裂过程中，染色质高度螺旋化后的一种形态。它由长臂（q）和短臂（p）两部分组成，中间被着丝点分开。根据长短臂的大小及着丝点位置的不同，将染色体分为3类，即：中央着丝粒染色体、亚中央着丝粒染色体和近端着丝粒染色体。不同的生物其染色体的组成类型不同，如人类的体细胞染色体具有全部3种类型，而小白鼠的体细胞染色体则全部都为近端着丝粒染色体，其数目为2n=40（图3-7-1）。

图3-7-1　小白鼠骨髓细胞染色体

【实验步骤】

1.取材 向小白鼠腹腔内注入秋水仙素（5μg/g），4～8小时后用脱臼法处死小白鼠，解剖，取出股骨，刮净骨上的肌肉并洗净，剪去股骨的两端，用注射器吸取预温37℃的氯化钾溶液，缓慢冲洗骨髓腔，将骨髓冲入离心管，然后，将毛细滴管插入离心管内缓慢地反复抽吸，使骨髓细胞团冲散，制成均匀的细胞悬液。(https://www.daowen.com)

2.低渗 向上述离心管内注入预温37℃的氯化钾溶液至9 ml，混匀后置37℃水浴箱内水浴30分钟。

3.离心 将两离心管配平后，对称放入离心机内，2 000～4 000 rpm/min离心10分钟，取出，弃上清液，留0.5 ml沉淀物，用弹指法将细胞分散，制成细胞悬液。

4.固定 向离心管内加入新配制的固定液（甲醇∶冰醋酸=3∶1）至5 ml，充分混匀后，室温下固定25分钟，然后再离心固定两次，最后一次看细胞多少留取适量沉淀物，混匀制成细胞悬液。

5.制片 取少量细胞悬液，由高处（30 cm左右）滴到预冷的载片上，每片两滴，用口吹散，晾干。

6.染色 将标本放入培养皿内，用姬姆萨染液覆盖于载玻片上，15分钟后取出载片，清水冲洗晾干。

7.观察 首先，将制好的标本放在低倍镜下寻找分散良好的中期分裂相，再转高倍镜或油镜观察。通过观察可见小白鼠染色体全部呈“V”字形，或“U”字形，都为近端着丝粒染色体，短臂很难看出。

8.注意

（1）小白鼠的体重最好在22 g～25 g之间，因其体重较大，股骨相对较大，便于取材（骨髓）。因小白鼠的后足相对较长，有的同学取材时误把胫腓骨当成股骨，而把股骨从中间剪断，而无法取到骨髓。

（2）冰水载玻片以冰水上面结一层薄冰为宜。

【实验报告】

（1）绘制小白鼠骨髓细胞染色体图。

（2）说明小白鼠骨髓细胞染色体的主要制备过程。

（3）在本实验中，秋水仙素、低渗液、固定液和冰片的作用是什么？