1.15.3　使用Compound E逆转实验

我们的假设是RND3通过负性调节Notch1信号通路调节GBM细胞的生长，如果假设成立，则敲低RND3时，Notch1信号通路激活，细胞活性增加；如果Notch1信号通路被阻滞，则敲低RND3后，因为无法激活Notch1信号，细胞活性不会增加，或者只是部分增加。因此，此实验要求先阻滞Notch1信号通路，再去敲低RND3。通过预实验，我们发现Compound E在加药6h后可以阻滞Notch1信号通路，而siRND3则需要在转染24h后才能敲低RND3超过50%，故即使是同时给予siRND3与Compound E两个干预因素，也是先阻滞Notch1信号通路。

（1）对数期生长的U251，胰酶消化，计数，电转，体系如下：

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（2）转染后细胞铺入六孔板，加入Compound E或者对照DMSO（2μl），此时Compoud E浓度为1μmol/L，实验分组为：

（3）转染后72h收集细胞计数，应用one way anova检验各组细胞细胞数之间差异有无统计学意义。