3.3.4 RND3调节GBM细胞增殖的关键信号通路是RND3调节的Notch1信号通路
为了探讨RND3调节Notch1信号通路在RND3调节GBM细胞增殖中的作用，我们使用Flag-NICD重新激活由RND3引起的Notch1信号通路抑制，结果发现，高表达RND3引起的细胞的抑制被逆转了，尤其重要的是，我们发现，在GBM细胞中阻断Notch1信号通路时，siRND3对GBM细胞增殖的调节消失了，说明RND3调节GBM细胞增殖的关键信号通路是RND3调节的Notch1信号通路。
RND3调节Notch1信号通路的具体分子机制尚未见相关报道。我们发现在人脑GBM和GBM细胞U251内，RND3都主要表达于细胞核内（图2-27A）。在Notch1信号通路中，处于细胞核中且直接与Notch1信号通路靶基因启动子结合的是NICD-CSL-MAML 1集团[57]，调节NICD-CSL-MAML 1集团可以直接调节Notch1信号通路[58]。在GBM细胞U251中，RND3可以与NICD、CSL和MAML 1结合并且降低其蛋白表达量，因此，RND3调节Notch1信号通路的分子机制是降低NICD-CSL-MAML 1集团的表达量。(https://www.daowen.com)
已有文献报道，在Notch1信号通路中，Notch1是调节GBM细胞增殖的关键蛋白[21]，Notch1的活性形式NICD则主要处于细胞核内，降低NICD表达量可以抑制Notch1信号通路[23，25，27，59-63]。我们发现，RND3可以与NICD结合并降低细胞核内NICD表达量（图2-27B，C），进而降低NICD与靶基因启动子结合的数量（图2-30 A），而NICD则可以完全逆转RND3对Notch1信号通路的作用，在没有NICD的情况下，RND3对Notch1信号通路的调节完全消失了。这一结果在人脑GBM标本中也得到了证实，RND3与Notch1蛋白表达量呈负相关。以上证据都强有力的说明，RND3通过结合并降低细胞核内的NICD是RND3调节GBM细胞Notch1信号通路的关键。
NICD，CSL和MAML 1任何一个表达量的降低都可以引起Notch1信号通路的抑制[72]。我们发现高表达RND3可以同时抑制NICD、CSL和MAML 1的表达，而单独给予NICD，RND3对Notch1信号通路的抑制作用就可以完全消失（图2-30B），提示单独给予NICD就可以完全逆转RND3对NICD、CSL和MAML 1的作用。而我们已经证实，RND3调节Notch1信号通路的关键机制是RND3结合和降低NICD表达量，因此RND3调节CSL和MAML 1表达量可能是通过调节NICD表达实现的，但这有待我们进一步研究证实。