整合型载体(YIp)
2025年09月26日
一、整合型载体(YIp)
YIp型载体比较简单,属于穿梭质粒、自我复制型载体,由大肠杆菌质粒和酵母的DNA片段构成。如Pyeleu10就是由ColE1质粒和酵母DNA提供的亮氨酸基因(Leu2+)片段构成的。由于Leu2+基因片段不含自主复制起始区,只作为选择标记,所以YIp型载体在酵母细胞中不能自主复制。YIp型载体含有4个主要部分:①多克隆位点;②抗氨苄青霉素基因Ampr;③大肠杆菌复制起点;④尿嘧啶自养型基因URA3,在酵母菌第V染色体上有URA3的同源顺序,通过交换可将YIp整合到第V染色体中。
YIp型载体可经转化导入受体细胞,进入细胞后的YIp质粒DNA通过与受体染色体DNA的同源重组,被整合到染色体上,并随染色体一起复制。这样质粒DNA以单拷贝基因形式稳定地遗传。YIp型载体的特点是转化率低(只有1~10转化子/μgDNA),但转化子稳定,多用于遗传分析工作。图6-6是YIp5载体的结构示意图。
图6-6 YIp5载体的结构示意图
Ampr—氨苄青霉素抗性基因;Tetr—四环素抗性基因;URA3—尿嘧啶自养型基因;pMB1ori—质粒pMBl复制起点;外圈标记为各种限制酶位点。