复制型载体（YRp）

YRp型载体是酵母的DNA片段插入到大肠杆菌质粒中构成的，其中酵母DNA片段不但提供了选择标记，还携带有来自酵母染色体DNA的自主复制顺序（ARS）。因为它同时含有大肠杆菌和酵母的自主复制基因，所以能在两种细胞中存在和复制，这种载体又称为穿梭载体。所谓穿梭载体，是指可以在两种截然不同的生物细胞中复制的载体，含有不止一个ori、能携带插入序列在不同种类的宿主中繁殖，在原核生物和真核生物细胞中都能复制和表达。这类载体不仅具有细菌质粒的复制起点及选择标记基因，还有真核生物的自主复制序列（ARS）以及选择标记性状，具有多克隆位点。通常穿梭载体在细菌中用于克隆、扩增，在酵母菌中用于基因表达分析，由于许多基因操作在大肠杆菌中更为方便，这样人们可以利用穿梭载体先在大肠杆菌中进行真核基因的大量扩增，然后再通过原生质体转化引入酵母细胞进行一些真核基因的研究。因此，穿梭载体在基因工程中广泛使用。图6-7是YRp7载体的结构示意图。

图6-7　YRp7载体的结构示意图

YRp型载体对酵母的转化率极高（102～103转化子/μgDNA），拷贝数也较高。由于YRp质粒以cccDNA分子形式存在，故很容易从酵母中提取到。但在受体细胞中不稳定，容易丢失，这是它的缺点。若在YRp型质粒中插入酵母染色体的着丝粒区，则构成了酵母着丝粒型载体（图6-8），由于着丝粒区的作用，这类载体在供体细胞中的行为类似染色体，能够稳定遗传，但以单拷贝存在，因此由供体细胞重新获得YCp质粒则比较困难。

图6-8　YCp50载体的结构示意图