核酸分离纯化的基本知识

核酸的分离纯化是获得目的基因及载体DNA片段的基本途径，分离的好坏直接决定了核酸样品的质量。真核生物95%的DNA主要存在于细胞核内，其余5%为细胞器DNA，存在于线粒体和叶绿体中。RNA分子约有75%存在于胞浆中，另有10%在细胞核内，15%在细胞器中。RNA以rRNA所占比例最大（80%～85%），tRNA及核内小分子RNA占10%～15%，而mRNA分子只占1%～5%。细胞中的DNA和RNA均与蛋白质结合，形成脱氧核糖核蛋白（DNP）和核糖核蛋白（RNP）。不同类型的核酸具有不同的结构特点：真核生物染色体DNA为双链线状大分子；原核生物基因组DNA、质粒及真核细胞器DNA相对较小，为双链环状分子；某些噬菌体DNA为单链环状分子；而RNA大多为单链线状分子；至于病毒的DNA、RNA分子，其存在形式多种多样，有双链环状、单链环状、双链线状和单链线状等。因此核酸分离纯化时应根据核酸特点、类型及结合状态等因素综合考虑，选择不同的分离纯化方法。