二、细菌培养鉴定

二、细菌培养鉴定

细菌培养包括需氧菌培养、厌氧菌培养、结核菌培养以及真菌培养等。不同细菌培养条件各异，因此应选择相应的培养基、接种方法和培养方法。

（一）常用的培养基

1.肉浸液培养基。每100ml肉浸液加入2～3g琼脂。肉浸液的成分为牛肉粉500g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml，也可作为其他培养基的基础。

2.含血肉浸液培养基。含有无菌脱脂纤维羊血或兔血的肉浸液培养基，一般情况下，每100ml加入葡萄糖0.2～0.25g，链球菌培养时则不加葡萄糖。

3.肉渣培养基。肉浸液中加入牛肉渣而成，主要用于培养厌氧菌。

4.巧克力琼脂培养基。肉浸液中加入无菌脱纤维兔血。主要用于流感嗜血杆菌等较难生长细菌的培养。

5.高盐甘露醇培养基。含有蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂、蒸馏水、甘露醇、酚红溶液等成分。

6.F-G琼脂培养基。含有磷酸铁和L-半胱氨酸等成分的肉浸液培养基，主要用于军团菌的培养。(https://www.daowen.com)

（二）培养方法

送检标本在经过初步的病原体形态学检查之后，进行细菌培养。由于不同细菌培养条件各异，临床医生在送检时应根据患者的症状、体征以及痰液的一般性状而要求有相对针对性的细菌培养。根据要求选择不同的培养基和不同的培养方法对标本进行培养，以防止一些特殊细菌的漏诊。

1.需氧培养法。是将细菌接种于培养基，在大气条件下，培养18～24h。该方法需氧菌和兼性厌氧菌均可在培养基上生长。但一些生长缓慢的细菌如结核杆菌需培养3～7d甚至1个月才能生长。需要培养较长时间的细菌，接种后应将试管塞好用石蜡凡士林封固，以防培养基干燥。

2.二氧化碳培养法。是将细菌接种于培养基上，再置于二氧化碳环境中培养的方法。如布氏杆菌需要在一定的二氧化碳环境中才能生长。

3.厌氧菌培养法。是将细菌接种于培养基上，再置于无氧环境中进行培养的方法。厌氧菌培养的标本采集和送检必须严格，一般来说，经口腔咳出的痰液对厌氧菌培养无送检价值。采集支气管分泌物做厌氧菌培养，可通过以下方式：①经环甲膜穿刺。②经皮肺穿刺。③经PBAL方式。标本采集后应立即送检，并及时处理。厌氧菌首先经过初代培养，然后进行次代培养。其初步鉴定常常根据细菌形态、革兰染色特性、菌落性状、吲哚和接触酶反应等特征进行判定，而最后确诊需要对培养细菌进行生化特性及终末产物等多项检查。

（三）细菌计数及结果判定

待细菌培养长出后，根据菌落计数和痰液标本的稀释倍数，计算出每毫升痰液所含细菌浓度，通常以每毫升菌落形成的单位（CFU/ml）来表示。然后确定是否为致病菌及细菌的种类。