1.1　材料、试剂与仪器

1.1　材料、试剂与仪器

1.1.1 试验材料

供试菌株蛇足石杉(采自福建南平)内生真菌盘长孢状刺盘孢C.gloeosporioides Cg01(本实验室分离)。现保存于国家中医药管理局亚健康干预技术实验室。

1.1.2 培养基

盘长孢状刺盘孢菌种活化采用马铃薯葡萄糖液体培养基(Potato Dextrose Broth，PDB)。液体发酵采用PDB加富培养基：去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，酵母粉2g，蛋白胨2g，KH2 PO4 1.5g，MgSO4 0.5g，NaCl 0.3g，加蒸馏水定容至1L后调节p H至6.5。转化子筛选采用MM培养基：KH2 PO4 1g，MgSO4·7H2 O 0.5g，KCl 0.5g，NaNO3 2g，葡萄糖20g，蔗糖200g，琼脂15g，蒸馏水定容至1L。TOP培养基将MM中琼脂的浓度改为10g。载体培养采用LB培养基：蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl 10g蒸馏水定容至1L。LB固体培养基在LB液体培养基中添加20g琼脂。所有培养基均需经121℃灭菌30min。

1.1.3 主要试剂(https://www.daowen.com)

Hup A标准品来自上海源叶生物科技有限公司；甲醇为色谱纯，醋酸铵、氯仿均为分析纯(国药集团化学试剂有限公司)；潮霉素、新霉素、崩溃酶(driselase)、纤维素酶、果胶酶、蜗牛酶、二甲基亚砜(DMSO)均为Sigma公司药品；溶壁酶为广东省微生物研究所制备；质粒p KOV21由中国农业科学院蔬菜花卉研究所病害课题组友情馈赠(Shen et al.2015)；所有限制性内切酶为NEB(北京)产品；质粒提取试剂盒EasyPure Plasmid MiniPrep Kit：全式金生物技术有限公司；切胶回收试剂盒：TaKa-Ra MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit；感受态transT-T1：全式金生物技术有限公司；重组试剂盒One Step Cloning Kit(Vazyme)。

1.1.4 主要仪器

Mettler Toledo p H计(上海梅特勒　-托利多仪器有限公司)；Agilent-1260 Infinity

高效液相色谱；Mettler Toledo XS205型电子分析天平(上海梅特勒　-托利多仪器有限

公司)；旋转蒸发仪(上海雅荣生化仪器设备有限公司)；恒温培养摇床-TS-211B(上海天呈实验仪器制造有限公司)。立式压力蒸汽灭菌锅LDZX-75KBS(上海申安医疗器械厂)；SW-CJ-2F型超净工作台(苏州净化设备有限公司)；ETC811 PCR仪(苏州东胜兴业科学仪器有限公司)；Champ Gel 5000 plus凝胶成像仪(北京赛止创业科技有限公司)；电泳仪(北京六一厂)；荧光定量PCR仪CFX96 real-time PCR(Bio-Rad)。