2.2 CgClr4、CgClr3、CgSir2回补株的构建
图2 CgClr4基因敲除突变体片段检测电泳图
Figure 2 Electrophoresis of detection PCR products of CgClr4 gene knockout transformant
A：目的片段检测(449bp)；B：目的基因5＇-侧翼+HPT片段检测(3 466bp)；C：目的基因3＇-侧翼+HPT片段检测(2 940bp)；D：野生型对照.1-8：转化子
A：Target fragment(449bp)；B：5＇-flanking of target gene+HPT(3 466bp)；C：3＇-flanking of target gene+HPT gene(2940bp)；D：Wild-type control.1 8：Transformants.
分别以CgClr4-T、CgClr3-T、CgSir2-T(表1)为引物，PCR检测转化子是否含有目的基因。PCR检测结果显示CgClr4回补株1～5号转化子均能检测到片段大小为449bp的目的条带(图5A)；CgClr3回补株2、3、4、5号转化子检测到片段大小为770bp的目的条带(图5B)；CgSir2回补株1～5号转化子检测到片段大小为616bp的目的条带(图5C)。随后将转化子测序结果与该基因序列进行比对，比对结果为100%相似，说明CgClr4、CgClr3、CgSir2基因回补株构建成功。
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图3 CgClr3基因敲除突变体片段检测电泳图
Figure 3 Electrophoresis of PCR products of CgClr3 gene knockout transformant
A：目的片段检测(770bp)；B：目的基因5＇-侧翼+HPT片段检测(3 777bp)；C：目的基因3＇-侧翼+HPT片段检测(2 213bp)；D：野生型对照.1-7：挑取的转化子
A：Target fragment(770bp)；B：5＇-flanking of target gene+HPT(3 777bp)；C：3＇-flanking of target gene+HPT gene(2 213bp)；D：Wild-type control.1-7：Transformants.
图4 CgSir2基因敲除突变体片段检测电泳图
Figure 4 Detection of PCR products of CgSir2 gene knockout transformant
A：目的片段检测(616bp)；B：目的基因5＇-侧翼+HPT片段检测(2 905bp)；C：目的基因3＇-侧翼+HPT片段检测(3 019bp)；D：野生型对照.1-8：挑取的转化子
A：Target fragment(616bp)；B：5＇-flanking of target gene+HPT(2 905bp)；C：3＇-flanking of target gene+HPT gene(3 019bp)；D：Wild-type control.1～8：Transformants.