2.3　RT-qPCR检测回补菌株基因表达量

2.3　RT-qPCR检测回补菌株基因表达量

所有提取的RNA样品的OD260/OD280均为1.7～2.1，经1%凝胶电泳鉴定，28S、18S条带清晰可见且28S∶18S亮度比值达到2∶1，无明显降解，RNA质量符合定量PCR试验要求。以beta-tubulin作为内参基因，对CgClr4、CgClr3、CgSir2回补菌株及野生型胶孢炭疽菌WT(wide type，对照组)基因表达水平进行分析。以WT对应基因表达量设为1，所有基因相对本菌株内参基因的表达量计算方法为2—Δct，相对WT的表达量计算公式为2—ΔΔct。结果显示CgClr4表达量1.0288，CgClr3、CgSir2表达量分别为0.8746、0.8938，均无显著性差异(p＞0.05)。因此可判断回补菌株中对应基因的转录正常且表达水平与WT一致(图6)。

图5　基因回补目的片段片段检测电泳图
Figure 5　Detection of PCR products of gene complemented transformant

A：CgClr4(449bp)；B：CgClr3(770bp)；C：CgSir2(616bp)A：CgClr4(449bp)；B：CgClr3(770bp)；C：CgSir2(616bp).(https://www.daowen.com)

图6　基因回补菌株相对基因表达水平
Figure 6　Relative expression of the gene in the rescued strain

*表示具有显著性差异(P＜0.05)
*Showing significant differences(P＜0.05).