4　讨论

溶剂体系筛选为HSCCC分离的关键步骤。根据虫草素，虫草素作为糖苷类化合物，具有一定的极性，常规生物碱类化合物的通用溶剂体系如氯仿甲醇-水［14］，正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水［15］等体系不适合虫草素的分离。根据虫草素在甲醇和正丁醇中具有很好的溶解度的特性，参考HBAW方法［13］，考察了不同比例的正己烷-正丁醇-甲醇-水体系对虫草素的分离情况，如上述结果所述，此溶剂体系对样品的分离效果不理想，极性仍然偏弱。醋酸乙酯正丁醇-水体系常用于糖苷混合物的分离［13］，实验中筛选出醋酸乙酯-正丁醇-水(2∶3∶5)体系对样品的分离色谱图显示分离效果较好，但是得到样品的峰质量分数仅90%左右，再次结合虫草素作为生物碱类化合物的性质，在溶剂体系中添加氨水调节分离p H值，最终获得了很好的分离效果。

本研究以分离制备虫草素为主要目标，由图2可知，样品在溶剂体系醋酸乙酯-正丁醇-0.5%氨水(2∶3∶5)下可分离获得4个组分，经HPLC检测，可知组分Ⅰ为杂质峰，包括了大量的色素和极性较强的化合物混合物；组分Ⅱ在260nm下检测在t R=8.3min处有一较明显的峰，但峰面积小，峰质量分数为75%左右；组分Ⅲ在260nm下检测在t R=10.9min和t R=11.8min处有2个较高的峰，2个峰的总峰面积百分比为90%以上，在后续研究中，可以将图2所示的组分Ⅱ和组分Ⅲ分别接收，进行浓缩和二次分离，获得更多高纯度的发酵液中的组分物质，实现资源的综合利用。(https://www.daowen.com)

本研究对分离蛹虫草发酵液中虫草素的HSCCC溶剂体系进行了筛选，最后确定以醋酸乙酯-正丁醇-0.5%氨水(2∶3∶5)作为溶剂体系分离制备虫草素，从400mg蛹虫草发酵液粗提物中一次分离获得43.8mg质量分数为98.7%的虫草素产品，实现了虫草素的高纯度制备。本工艺对高纯度虫草素制备的扩大生产具有重要的参考价值，同时为虫草素的药理研究提供了重要的物质基础。