不同产地当归中阿魏酸和藁本内酯的含量
1.仪器与试药 Agilent-1100高效液相色谱仪（DAD检测器、自动进样器、在线脱气、四元泵）、KQ-300VDB型数控超声波清洗器、A4DL型自动纯水蒸馏器、BS210S型电子天平。阿魏酸对照品购自中国药品生物制品检定所，藁本内酯对照品由上海融禾医药科技发展有限公司提供；当归药材采集于甘肃、陕西、贵州、云南、湖北、四川等地，经鉴定为伞形科植物当归Angelicasinensis（OlⅣ.）Diels的干燥的根；乙腈（美国Burdick&Jackson公司）为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。
2.当归HPLC含量测定
（1）色谱条件 色谱柱：DikmakromasilC18（250mm×4.6mm5μm）；流动相；乙腈A—0.085%磷酸液B；梯度洗脱，0～15分钟（15%～20%A），15～30分钟（20%～50%A），30～60分钟（50%～80%A）；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：325nm。进样量为10μL。
（2）对照品溶液的制备 分别精密称取阿魏酸1.04mg和藁本内酯和5.02mg，置于20mL棕色量瓶中，精密加入0.05%乙酸-甲醇液溶解并定容至刻度线，摇匀，即得0.052mg/mL阿魏酸和0.252mg/mL藁本内酯的混合对照品液。
（3）供试品溶液制备 取当归粉末（50目）0.5g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入5%甲酸-甲醇液25mL，摇匀，称定重量，加热回流30分钟，再称定重量，用5%甲酸-甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
（4）标准曲线的制备 分别精密吸取混合对照品溶液1、2、4、6、8、10µL，注入液相色谱仪中，测定2种对照品的色谱峰面积。以峰面积为纵坐标Y，含量为横坐标X，绘制标准曲线，结果阿魏酸的标准曲线为：Y=3473.5618X-5.178（R2=0.9997）；藁本内酯的标准曲线为Y=1657.2X-17.238（R2=0.9997）；线性范围分别为：0.052～0.52μg；0.252～2.52μg。
（5）方法学考察 精密度的考察结果：阿魏酸和藁本内酯的峰面积的RSD（n=5）分别为0.89%。稳定性的考察结果：阿魏酸和藁本内酯峰面积的RSD（n=5）分别为1.47%、2.03%。重复性的考察结果：阿魏酸和藁本内酯峰面积的RSD（n=5）分别为2.24%、2.38%。加样回收率考察结果：阿魏酸和藁本内酯的平均回收率为98.6%、98.2%；RSD（n=5）分别为2.44%、2.65%。
（6）含量测定 按照上述2.1项下的含量测定方法，对不同产地当归中的阿魏酸和藁本内酯进行含量测定。结果表明，不同产地当归中该两种成分的含量差异较大，其中阿魏酸的含量在0.2752～0.7094mg/g；藁本内酯的含量在0.8186～6.8832mg/g。
3.挥发油的含量测定 分别称取不同产地当归药材粉末（50目）300g，按2010年版《中国药典》（一部）附录XD挥发油测定法（甲法）提取挥发油，并测定其含量。实验结果表明，不同产地当归中总挥发油的含量差异较大，其含量在2.0517～16.2316mg/g。
4.指标的选择 2020年版《中国药典》当归项下以阿魏酸和总挥发油的含量为质量评价指标，药理和化学研究表明，藁本内酯是当归挥发油的主要成分，具有较强的药理作用。目前，采用HPLC法同时对不同产地当归中的阿魏酸和藁本内酯进行含量测定的报道较少。本实验以阿魏酸、藁本内酯和总挥发油的含量为指标，对不同产地当归中以上3种成分进行了含量测定，为当归的质量标准提供一定的参考依据。
5.提取条件的选择 实验对回流提取法和超声提取法两种提取方式进行了考察，结果表明，回流提取法中阿魏酸和藁本内酯的含量较高，因此实验采用回流提取法；同时对提取时间也进行了考察，结果表明，回流提取30分钟和60分钟，两者差异无统计学意义，因此选择回流提取时间为30分钟。
6.检测波长选择 实验于200～600nm波长下，分别对阿魏酸和藁本内酯两种对照品进行波长扫描，实验结果表明，阿魏酸在316nm处有最大吸收，藁本内酯在325nm处有最大吸收，阿魏酸在该波长下也具有较大吸收，经过综合分析，选择波长为325nm。
7.含量测定 含量测定结果表明，当归入药部位不同3种成分的含量也具有一定差异，总体而言其大小的顺序为：归尾大于全当归大于归头；而不同产地当归中3种成分的最大值与最小值之间含量差异较大，其中阿魏酸含量差异约为2倍，藁本内酯含量差异约为8.4倍，总挥发油含量差异约为7.9倍，造成了市场上当归药材质量的参差不齐，因此应尽快制定或完善当归饮片的质量控制标准，同时还需对不同产地的栽培条件进行考察，建立当归的GAP基地，从源头上保证当归的质量。而实验结果表明，甘肃岷县产地当归中3种成分含量均较高，质量最好，作为当归的道地产区具有一定的科学性。