生地黄中梓醇的含量测定
地黄为玄参科植物地黄的块根，为中医常用的补益中药之一。地黄的化学成分以环烯醚萜苷类为主，主要有梓醇、二氢梓醇、乙酰梓醇等，其中梓醇为主要有效成分之一，具有降血糖、利尿、缓和泻下等多种生物活性。由于该类成分极性大、结构相似，给分离带来较大困难。本实验采用薄层扫描法，对地黄的不同炮制品中的梓醇含量进行了测定，为地黄药材及其制剂的质量控制提供了方法。
1.仪器与材料 CS-9000型薄层扫描仪（日本岛津公司）；定量毛细管（美国Drummand公司）；硅胶G（青岛海洋化工厂）；梓醇（供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号0808-200104），所用试剂均为分析纯。鲜地黄、生地黄、熟地黄药材样品均购自广州市医药公司，并经鉴定为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.的块根。
2.测定材料 薄层板：称取硅胶G30g，加入0.3%CMCNa溶液90mL，研磨均匀，用涂铺器铺于10cm×10cm的玻璃板上，厚度为0.5cm，共制得15块。室温晾干，110℃活化后置干燥器中备用；展开剂：醋酸乙酯-甲醇-水-醋酸（10∶2∶0.5∶0.5），展开前预饱和15分钟，展距为9cm；显色剂：10%硫酸-乙醇溶液，喷雾显色，于105℃烘烤至斑点清晰。
3.薄层扫描条件 测定波长λS540nm，参比波长λR650nm；反射法锯齿扫描，线性化参数SX=3，狭缝1.2mm×1.2mm。
对照品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的梓醇对照品10.5mg，置5mL容量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，即得浓度为2.1mg/mL的对照品溶液。
4.供试品溶液的制备
（1）提取溶剂的选择 精密称取5份生地黄粉末（过20目筛）约2.0g，置具塞三角瓶中，分别加入水、60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、甲醇各100mL，超声提取1小时，过滤，滤液置水浴锅上蒸干，残渣用适量甲醇溶解，经0.45μm微孔滤膜过滤后转移至5mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取上述溶液各3μL，按上述方法进行测定。结果表明，80%乙醇对梓醇的提取率最高。
（2）提取方法的选择 精密称取3份生地黄粉末约2.0g，置圆底烧瓶中，加入100mL80%乙醇，分别采用回流提取、索氏提取及超声提取，按上法测定。结果表明，超声法对梓醇的提取率最高。
（3）提取时间的选择 精密称取份生地黄粉末约2.0g，置具塞三角瓶中加入80%乙醇100mL，分别超声提取15分钟、30分钟、45分钟、60分钟，依法测定。结果表明，超声提取45分钟即可提取完全。
5.线性范围的考察 精密吸取梓醇对照品溶液1μL、2μL、3μL、4μL、5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-水-醋酸（10∶2∶0.5∶0.5）展开，展距9cm，取出，晾干，喷以10%硫酸-乙醇溶液，于105℃烘烤至斑点清晰，梓醇显棕红色斑点。按上述薄层扫描条件测定斑点的峰面积，以点样量（μg）为横坐标（X），斑点峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，回归方程为Y=3805.1X+2962.4，r=0.9990，梓醇在2.1～10.5μg内线性关系良好。
6.精密度实验
（1）仪器精密度 精密吸取梓醇对照品溶液5μL，点于同一薄层板，共点样5次，依法展开，显色，扫描，测定峰面积，测得峰面积的平均值为42415.82，RSD=0.55%。
（2）同板精密度 精密吸取同一浓度的样品溶液3μL，点于同一薄层板上，共点样5次，依法展开，显色，扫描，测定峰面积，测得平均峰面积为22094.52，RSD=2.41%。
（3）异板精密度 取薄层板5块，在同一块薄层板上点两个对照品溶液（分别为2μL、4μL）和3个生地黄供试品溶液（均为3μL），依法展开，显色，扫描，测定峰面积，采用外标两点法定量，测得梓醇含量的RSD=1.91%。
（4）稳定性试验 精密吸取生地黄供试品溶液3μL，对照品溶液2，4μL，按样品测定项下依法测，每隔30分钟扫描1次，测得峰面积并计算含量。结果表明，梓醇含量在2小时内稳定。
（5）重现性实验 精密称取生地黄粉末5份，每份约2g，按样品测定项下方法制备样品溶液，分别精密吸取上述溶液3μL，对照品溶液2μL、4μL，点于同一薄层板上，依法测定梓醇的含量，RSD=0.89%
（6）加样回收率实验 取已知含量的生地黄粉末5份，精密称定，分别加入梓醇对照品适量，按供试品溶液的制备和样品测定项下操作，平均回收率为98.75%。
7.样品测定 精密称取鲜地黄、生地黄、熟地黄粉末（过20目筛）各约2.0g，置具塞三角瓶中，分别加入80%乙醇100mL，超声提取45分钟，过滤，滤液置水浴锅上蒸干，残渣用适量甲醇溶解，经0.45μg微孔滤膜过滤后转移至5mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取3个样品溶液（均为3μL）及两个对照品溶液（分别为2μL、4μL），点于同一块薄层板上，按上述色谱和光谱条件进行测定，采用外标两点法定量。