三、接种方法
划线法主要是借助划线而将混杂的细菌在琼脂表面分散开，使单个细菌能固定在某一点，生长繁殖后形成单个菌落，以达到分离纯种的目的。
1.分区划线法
此方法多用于污染较为严重的样本中的细菌分离（图2-2-4）。将一个平板分成4 个不同面积的区域划线，第一区面积最小，可称为菌源区；第二区和第三区为逐级稀释的过渡区；第四区是提供纯种用的关键区。在划第二区之前，应将接种环灼烧1 次，待冷却后再划线。一般情况下，平板上4 区面积应是第四区＞第三区、第二区＞第一区。
图2-2-4 四区划线法
2.连续划线法
该方法较分区划线法操作简单，可用于一般样本中细菌的分离培养（图2-2-5）。但对于污染严重的样本，分离效果不如分区划线法。
图2-2-5 连续划线法
当获得纯化的细菌后，常需要接种到相关的培养基中，以测试其各种生物学性状。一般可用斜面培养基、液体培养基、半固体培养基来检验细菌的培养特性。
3.倾注平板法
此方法用于液体样本的细菌计数，适用于厌氧、兼性厌氧且对热不敏感的微生物。将样本用灭菌生理盐水稀释（10 倍的浓度梯度进行倍比稀释），吸取1ml 稀释液加入平皿，倾注高压灭菌后并冷却至50℃左右的培养基，混匀，冷却后倒置培养［图2-2-6（a）］。
4.涂布培养法
涂布培养法是用于活菌计数的一种培养方法，适用于需氧微生物的观察。将待测样品制成倍比稀释的稀释液后，取一定量加到培养基表面，使用涂抹棒进行均匀涂抹，倒置培养［图2-2-6（b）］。(https://www.daowen.com)
图2-2-6 倾注培养和涂布培养
（a）倾注培养法；（b）涂布培养法
5.斜面接种法
将细菌培养物划线接种于斜面培养基上的方法［图2-2-7（a）］，用于扩增细菌、保存菌种，或用于观察细菌的某些生化特性。
图2-2-7 细菌不同接种方法
（a）斜面接种；（b）液体接种；（c）穿刺接种
6.液体接种法
将细菌培养物接种于液体培养基的方法，用于扩增细菌、观察细菌的生长特性或测定细菌的生化特性［图2-2-7（b）］。
7.穿刺培养法
用接种针垂直地穿入半固体培养基中心至底部，然后沿着原接种线将针拔出［图2-2-7（c）］。用于检验细菌的运动性或观察细菌的生化反应。