四、细菌培养方法

四、细菌培养方法

1.一般培养

需氧菌或兼性厌氧菌采用此方法。使用普通恒温培养箱［图2-2-8（a）］，温度设置一般为35～37℃，培养时间为18～24h，一些较难生长的细菌需要培养更长的时间。此外，也有些细菌较为特殊，如李斯特菌在4℃也能生长，弧菌的最适生长温度为28～30℃。

2.CO2培养法

有些细菌在初次分离时须置5%～10% CO2环境中才能生长良好，如猪链球菌、副猪嗜血杆菌和胸膜肺炎放线杆菌等。目前常用的CO2培养法有如下几种。

（1）CO2培养箱法：这类培养箱外接钢瓶，钢瓶内充满CO2，气体通过管道进入培养箱［图2-2-8（b）］。培养箱既能调节温度，也能调节培养箱内CO2的含量。

（2）烛缸法：此方法是将点燃的蜡烛放入烛缸内（图2-2-8），在烛缸磨砂边缘涂上凡士林后盖上盖子，蜡烛由于氧气缺乏而自行熄灭，烛缸内CO2的含量达到5%～10%。

3.厌氧培养法

厌氧菌在有氧的情况下不能生长，必须在无氧条件下培养，如产气荚膜梭菌等厌氧菌。厌氧培养法主要包括厌氧罐法、厌氧袋法和厌氧手套箱法。

（1）厌氧罐法：将接种的平板或液体培养基放入厌氧缸内，用物理或化学的方法使缸内造成厌氧环境（图2-2-9）。包括抽气换气和气体发生袋法。抽气换气法适用于一般实验室，将标本接种平板放入厌氧罐，用真空泵抽出罐中空气，然后充入高纯N2使压力真空表指针回归0 位，反复3 次，最后一次充入70%的N2、20%的H2和10%的CO2。气体发生袋法是采用化学的方法，通过化学反应产生CO2和H2，最后在厌氧罐中加入指示剂和平板培养基即可进行培养。(https://www.daowen.com)

（2）厌氧袋法：厌氧袋法是在塑料袋内造成厌氧环境进行细菌培养（图2-2-9）。原理与气体发生袋法相同，只是用塑料袋代替了厌氧罐。该方法不需要特殊设备，操作简便，实验室或外出现场接种均可。

（3）厌氧手套箱法：厌氧手套箱法是当今公认的培养厌氧菌最佳方法之一。厌氧手套箱是一个密闭的箱体，由手套操作箱、传递箱、空气压缩机及气瓶等组成，箱体前面有一个透明面板，板上装有两个手套，可通过手套进行操作。但是，该仪器价格昂贵，且长期维持厌氧环境需要消耗大量气体，费用较高。

4.血液培养法

血液培养法是对无菌采集的体液或败血症、菌血症等患病动物血液中的病原微生物进行培养的一种方法。目前应用较多的是全自动血液细菌培养仪（图2-2-10），包括培养系统、检测系统、外围设备和计算机。基本原理是微生物在培养过程中产生的代谢产物或消耗的营养物质与培养瓶中的感受器发生结合，信号经检测系统检测得到信号变化的参数，进而判断瓶内是否有微生物生长。