微量肉汤稀释法

二、微量肉汤稀释法

肉汤稀释法药敏试验是通过将抗菌药物经一定浓度的倍比稀释后，将待测试细菌与不同浓度梯度的药物共同孵育，能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度记作最小抑菌浓度（MIC）。本法具体操作步骤如下。

1.材料准备

待测细菌、MH 肉汤、抗生素粉末、灭菌生理盐水、无菌试管、无菌棉拭子、比浊仪、8 孔道微量移液器、96 孔细胞培养皿等（图2-4-4）。

2.抗菌药物的制备

根据NCCLS 抗菌药物敏感性操作标准推荐的药物浓度范围制备抗菌药物［图2-4-5（a）］。用分析天平精确称量药品粉末，按照计算，加入定量的灭菌生理盐水稀释至指定浓度，并按照浓度梯度，每孔10µl 依次加入96孔培养皿中，并且每种药物最后预留一孔空白对照。制备的抗菌药物应现配现用，防止因药物降解而影响实际药物浓度。

3.接种物制备(https://www.daowen.com)

用棉签蘸取菌落于灭菌蒸馏水中混匀，使其达到0.5 麦氏比浊标准［图2-4-5（b）］。取100µl 菌液加入至100ml 的MH 肉汤中，充分混匀［图2-4-5（c）］。

4.接种培养

向加入药物的孔中加入菌液，每孔加入100µl［图2-4-5（d）］。向空白孔中加100µl 菌液作为阳性对照。接种后放入湿盒，并置于36℃恒温培养箱中培养16～24h。

5.结果判定

在阳性对照成立的情况下，根据不同药物浓度小孔内的细菌生长情况，以小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC（图2-4-6）。当微量肉汤稀释法出现单一跳孔时，应记录抑制细菌生长的最高药物浓度；如出现多处跳孔，则应重复试验。