癌栓的分子生物学特性
1.肝癌PVTT的分子生物学特性
染色体不稳定性分析结果显示肝癌患者来源PVTT同其他肝癌转移灶（如肝内转移、淋巴结转移等）相似，与肝癌原发灶具有一致的染色体结构异常，其等位基因不平衡现象发生在—lp、+1q、—4q等多个染色体上。DNA测序联合拷贝数变异（copy number variation，CNV）发现绝大多数PVTT与相应的原发肝癌具有相似的基因组学特征，但有小部分PVTT具有不同于原发灶的基因组学特征。染色体区域2q24.1-q31.1在PVTT中拷贝数缺失，但是在肝癌组织中拷贝数增加，染色体区域5q13.2-q35.2和15q11.2-q21.1在PVTT中拷贝数增加，但是在肝癌组织中拷贝数缺失。除了基因组水平差异，PVTT在RNA、蛋白表达及蛋白修饰水平上也具有不同于原发灶的特性。RNA测序分析发现PVTT组织和肝癌组织具有296个差异表达的编码基因（GSE69164），对这些基因进行基因本体（gene ontology，GO）富集分析发现差异基因主要涉及细胞黏附（cell adhesion）、器官发育（organ development）和细胞外基质（ECM）相关的生物学过程。同时，PVTT具有独特的微RNA（microRNA，miRNA）和长非编码RNA（long noncoding RNA，lncRNA）表达谱，包括miR-135a、miR-302d和miR-10b等在内的多个miRNA分子在PVTT中的表达明显高于肝癌组织。蛋白质二维电泳联合质谱分析技术检测发现，与原发肝癌相比，远离原发灶的PVTT组中有9个蛋白表达水平上调，10个蛋白表达水平下调（见表1-1），这些蛋白涉及肿瘤发生、细胞转移/浸润等生物学过程。同位素标记相对和绝对定量技术（isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ）检测发现，PVTT与肝癌组织相比有10个蛋白发生异常磷酸化（见表1-2），与癌旁对照组织相比有80个蛋白异常磷酸化，相关蛋白主要涉及细胞增殖、黏附转移及免疫反应等生物学过程。这些研究表明，PVTT具有独特的分子生物学特征，其特异的异常表达分子主要涉及肿瘤发生、细胞黏附、细胞转移/浸润等过程，提示相关分子及生物学过程在癌栓发生中发挥了重要的作用。
表1-1 与肝癌组织相比PVTT中异常表达的蛋白
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表1-2 同肝癌组织相比PVTT中癌栓中异常磷酸化的蛋白
2.肾癌合并癌栓的分子生物学特性
肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma，ccRCC）癌栓也具有独特的表达谱特征。通过多区域全外显子测序检测发现在483个目标基因中，有106个（22%）含有单核苷酸变异（SNVs），插入缺失突变的基因在静脉癌栓和肾癌组织之间存在差异，其中43个基因仅在静脉癌栓中发生突变，63个基因仅在肾癌组织中突变。采用全外显子测序分析发现癌栓组织中包括MMP9、SBSN、XPNPEP2和IL13RA2在内的25个肿瘤转移相关基因的突变频率明显高于ccRCC组织。基因集富集分析（gene set enrichment analysis，GSEA）组织中特异表达的基因发现，包括免疫反应相关信号通路（如淋巴细胞增殖、溶酶体途径及炎症反应通路）在内的15个信号通路在癌栓中明显富集，表明癌栓组织中的特异表达分子及相关信号通路可能参与了癌栓发生。除了特异的分子表达谱，癌栓组织中浸润的免疫细胞也与原发灶不同。通过RNA测序联合分析肾癌组织和癌栓组织中免疫细胞分布情况发现，癌栓中有较高比例的M1型巨噬细胞浸润。同时发现，癌栓中有程序性死亡受体-配体1（programmed cell death-ligand 1，PD-L1）的表达，但不同来源的组织之间PD-L1的表达情况存在较大差异，并且在肾癌和癌栓中平均血小板体积（mean platelet volume，MPV）与PD-L1表达存在负相关。在肾癌合并癌栓中PD-L1的表达明显低于肾癌的肿瘤组织。肾癌和癌栓中的PD-L1表达情况与肿瘤细胞的高恶性进展特性相关，提示肿瘤免疫微环境可能也参与了癌栓的发生。同时，伴有癌栓的肾癌组织与无癌栓的肾癌组织之间也存在较大的基因组学差异。与无癌栓的肾癌组织相比，伴有癌栓的肾癌组织中检测到更多的基因突变负荷（tumor mutational burden，TMB）和更高的基因组不稳定性，表明某些原发肿瘤组织可能更容易诱导癌栓发生。