单靶点CAR-T细胞短时杀伤活性检测

二、单靶点CAR-T细胞短时杀伤活性检测

利用荧光素酶报告法检测CAR-T细胞短时杀伤活性。计数表达荧光素酶的靶细胞（抗原阳性或阴性细胞）后，按照不同效靶比（E∶T＝0∶1，1∶1，5∶1和10∶1）分别加入普通T细胞或CAR-T细胞进行共孵育，24小时后加入荧光素（D-luciferin）检测荧光强度，并计算靶细胞活性。

首先对CD276特异性CAR-T 细胞的杀伤活性进行了检测。杀伤实验结果显示，CD276特异性CAR-T细胞仅能杀伤抗原阳性的TE-1细胞，且展示出T细胞数量依赖的杀伤活性（图16-14）。而对抗原阴性的Raji细胞，CD276特异性CAR-T细胞未展示出显著杀伤活性（图16-14）。接下来，我们又对HER2特异性的单靶点CAR-T细胞进行了检测。HER2特异性CAR-T细胞同样展现强大的抗原依赖的杀伤功能（图16-15）。另外，携带不同共刺激信号（CD28或41BB）的CAR- T细胞展示出类似的短时杀伤效果（图16-15）。这些结果说明我们成功构建了CD276或HER2特异性CAR-T细胞，为后续研究奠定了良好基础。

图16-14　CD276 特异性CAR-T 细胞的杀伤活性(https://www.daowen.com)

CD276特异性CAR-T细胞能够杀伤ESCC细胞TE-1（CD276+HER2+），而对B细胞淋巴瘤细胞Raji（CD276-HER2-）没有显著影响。

图16-15　HER2 特异性CAR-T 细胞的杀伤活性

HER2特异性CAR-T细胞能够杀伤ESCC细胞TE-1（CD276+HER2+），而对B细胞淋巴瘤细胞Raji（CD276-HER2-）没有显著影响。