2.2.3　无菌操作技术

防止污染是培养成败的关键因素。体外培养细胞缺乏抗感染能力，所以在操作中应尽量做到严格的无菌操作。

细胞培养无菌操作主要分为两个部分：接种前的准备工作、接种。

1）接种前的准备工作

对于长期闲置的接种室，在接种前需要对接种室进行全面消毒，可用40%甲醛溶液进行喷雾消毒，密闭12～24 h，然后打开换气窗10～15 min。

新安装的或长期未使用的工作台，工作前必须对工作台和周围环境用真空吸尘器或不产生纤维的工具进行清洁工作，再采用药物灭菌法或紫外线灭菌法进行灭菌处理。每次使用工作台时，应先用75%酒精擦洗台面，并提前30～50 min打开紫外线灭菌灯，处理净化工作区内积累的微生物。在关闭紫外灯后应启动送风机，使之运转2 min后再进行培养操作。净化工作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流不受干扰。(https://www.daowen.com)

实验人员进入无菌室要穿无菌服、戴帽子和口罩；每周清洗消毒一次；所用物品要严格消毒并一次性准备好；瓶口要用酒精火焰消毒；无特殊情况实验人员尽量减少出入。操作前用台内的75%酒精棉球擦拭手、手腕，再擦拭培养基和工作台。

2）接种

接种时要在超净工作台中央无菌区域，勿在边缘的非无菌区操作。动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。要小心取用无菌的实验物品，勿触碰吸管尖头部和容器瓶口，也不要在打开容器的正上方进行实验操作。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜45°取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放于工作台上。为拿取方便，工作台面上的用品要布局合理，一般左手使用的用具放置在左手侧，酒精灯位于中间，右手用品放在右侧。

所有操作应在火焰近处并经过灼烧进行，金属器械不能过度灼烧，防止烫伤培养材料。