3.3.3 脱毒植物检测及保存
经过各种脱毒途径获得的脱毒植株，都必须进行严格的病毒鉴定，证明确实无病毒存在又具备优良的农艺性状的植株，才能作为生产无病毒苗的种源，供生产使用。
1）检测方法
（1）直接测定法
直接测定法是直接观察植株茎、叶等器官有无病毒引起的可见症状。然而，病毒侵染寄主并不一定都使之表现出可见症状，有的症状要病毒侵染一段时间后才表现出来，因此需要更敏感的植物来测定病毒是否存在。
（2）指示植物法
指示植物对病毒极为敏感，一旦感染病毒就会在叶片或全株上表现出特有的病斑。这一方法最早是1929年由美国病毒学家Holmes发现的。他用已被TMV感染的普通烟叶粗汁液与金刚砂相混，在心叶烟叶子上摩擦，2～3天后，后者叶片上出现了局部坏死斑，且在一定范围内，枯斑数与侵染病毒浓度成正比。病毒寄生范围不同，同一病毒可用一种或几种指示植物进行鉴定。
（3）抗血清鉴定法
病毒是由蛋白质和核酸组成，因而也是一种抗原，注射到动物体后，会在血清中产生抗体，又称抗血清。抗原与抗体相结合，即为血清反应。不同病毒产生的抗血清具有高度的特异性和专一性，因此，可用已知病毒的抗血清来鉴定未知的病毒种类。该方法简便、准确、速度快，一般几分钟至几小时即可完成，是植物病毒鉴定最有效的方法之一。
（4）电镜检查法(https://www.daowen.com)
采用电子显微镜，可直接观察样品材料有无病毒存在，还可进一步鉴定病毒颗粒大小、形状和结构，这些特征相当稳定。因此，电镜检查法既准确又有效，但需要一定的设备和技术，如超薄切片技术、背景染色法、扫描电镜等。
（5）分子检测法
分子生物学检测方法具有快速、简便、灵敏度高和特异性强的优点。常用有聚合酶链式反应技术（PCR）进行检测。
2）无病毒原种的保存与繁殖
无病毒原种的保存可以利用隔离法进行保存。隔离保存是指将无病毒原种种在隔离区。有条件的可找适合的海岛、高冷山地、新区等气候凉爽、害虫少、有利于原种材料生长的地方。在隔离区，最好将原种材料种植保存在网室中，防止昆虫特别是传染病毒的蚜虫侵入。种植区土壤也应消毒灭菌，保持周围清洁。还要防止工具、衣服等接触传染病毒并定期复查。
脱毒种苗经鉴定后，可选择优良株系，重新接种于试管内进行长期保存。一般每月需继代一次，这种方法相对比较麻烦。简化而安全的办法是可以在培养基中加入生长延缓剂，如比久或矮壮素，由每月继代一次延至2～3月或更长时间继代一次。试管苗长至2 cm高时，将其放在4℃冰箱内低温保存，保存期可达1年左右。或者将试管苗在液氮中长期保存，如图3.4所示。
图3.4 无病毒个体（草莓）的培养和增殖过程
无病毒原种在生产上的繁殖利用，关键在于防止病毒再度感染。要建立一套完整的良种繁育制度，生产场所做好土壤消毒和防昆虫工作，一旦发现感病，应该重新采用无病毒植株以替换感病植株。
