3.5.2　突变体筛选方法

3.5.2　突变体筛选方法

1）直接选择法

直接选择法是指利用在选择条件下细胞突变体可优先生长的特点进行筛选。主要用于抗性突变体的选择，分为正选择法和负选择法。

（1）正选择法

正选择法是较简单的一种方法，在离体植物细胞培养基中加入特定物质，即把细胞置于对其生长有害的化合物（选择剂）胁迫之下，正常表型细胞死亡而抗性突变体细胞能生长，从而将其分离出来。可采用一步选择法或多步选择法，一步选择法所用选择压可一次性地消灭正常型细胞，而多步选择法则使突变体在一系列浓度梯度的抑制剂中进一步培养，最终可将能耐受最高生长抑制剂浓度的突变细胞团选择出来。

（2）负选择法

负选择法是在特定培养基中，让正常表型细胞生长繁殖，突变体细胞受抑制不分裂呈休眠状态，然后用一种能毒害正常生长细胞，而对休眠状态突变细胞无害的药物淘汰正常细胞，再用正常培养基恢复突变体的生长。该方法主要用于营养缺陷型突变体的筛选。(https://www.daowen.com)

2）间接选择法

间接选择法是借助与突变体表型有某种相关特征作指标进行筛选的方法。

3）绿岛法

绿岛法是利用已分化组织进行筛选和鉴定的方法。例如，一些除草剂只作用于绿色光合细胞，对无叶绿体分化的培养细胞难以发挥作用。这时可以在整体植株叶上用除草剂使叶片细胞发生突变并制造选择压力，使抗性细胞存活下来，形成局部绿色斑点，即绿岛，然后切下该部位细胞进行培养，再分化形成抗性植株。

应用自发突变或诱发突变细胞并结合选择突变细胞系的方法，可以筛选培育出对极端环境因素有抗性的植株，也可能选出高产优质的作物品系。突变体诱导和筛选方法已成为近代细胞水平及基因水平上改变植物遗传性的有效方法之一。