4.2.1　原生质体分离方法

1）机械分离法

原生质体的机械分离法是借助于利器如刀或机械磨损等措施使细胞壁破损，促使原生质体释放的方法。将材料置于高渗糖溶液中预处理，使其发生质壁分离，当原生质体收缩成球状时，用利刀切割或机械磨损组织，原生质体可从受损的细胞壁中释放出来。机械法有局限性，只能用于可以发生明显质壁分离的材料，且只获得少量原生质体，完整原生质体更少。常用于分离藻类原生质体。(https://www.daowen.com)

2）酶解分离法

细胞壁主要成分为纤维素、半纤维素、果胶质和少量蛋白质等。原生质体的酶解分离法指将材料放入能降解细胞壁的混合等渗的酶液中保温一定时间，在酶液的作用下，细胞壁被降解，从而获得大量有活力的原生质体的方法。常用的酶种类有纤维素酶类、果胶酶类、蜗牛酶和胼胝质酶等。其中纤维素酶类包括纤维素酶、半纤维素酶、崩溃酶；果胶酶类包括果胶酶和离析酶。不同植物种类、不同器官和组织的细胞壁组成不尽相同，因此在制备原生质体时应选用相应的酶种类和浓度进行处理。如叶片，用纤维素酶和果胶酶就能分离得到原生质体；而愈伤组织则需再添加半纤维素酶或离析酶才能得到较多的原生质体。崩溃酶主要用在木本植物等细胞壁难降解的植物上；蜗牛酶和胼胝质酶主要用于花粉母细胞和四分孢子原生质体分离。酶解分离法的优点是可以应用于几乎所有的植物及植物材料，以获得大量的原生质体。缺点是这些酶制剂常污染有核酸酶、蛋白酶、过氧化物酶及酚类物质，会影响到原生质体的活力。