10.2.1 亲本选择
设计免疫方案时首先应确定适当的动物品系。由于免疫动物品系与所采用的骨髓瘤细胞差异越远，产生的杂交瘤细胞稳定性越差，在单克隆抗体制备过程中，一般采用与骨髓瘤供体细胞来源同一品系的动物进行免疫。这样杂交融合率高，也便于建系后的杂交瘤细胞能在同系动物中生长，以收获大量腹水制备单克隆抗体。
1）骨髓瘤细胞
作为融合亲本之一的瘤细胞一般是丧失合成自身免疫球蛋白能力的骨髓瘤细胞系，否则杂交细胞不但会产生来自两个亲本的两种抗体，而且可能产生两种抗体轻重链杂合的抗体。此外该瘤系必须是对选择剂敏感的，这样在融合后就可以用选择剂把未融合的瘤细胞除去。用于融合的骨髓瘤细胞最好处于对数生长期，如果是冻存的细胞系，最好在融合前两周先进行复苏。
骨髓瘤细胞一般培养在37℃5%CO2饱和湿度的培养箱中。融合前收集对数生长期骨髓瘤细胞，用0.5%的台盼蓝1mL与等量的细胞悬液混合染色，活细胞（不着色的）数在95%以上即可用于融合。
2）免疫脾细胞(https://www.daowen.com)
高度免疫个体的激活淋巴细胞是B细胞的最佳来源。一般在实验的数周内分数次用特异抗原免疫小鼠，促使其脾脏内产生大量处于活跃增殖状态的特异B细胞。适当的免疫途径对免疫效果的好坏也有重要影响，不同的抗原可经不同的途径进行免疫，最为常用的是腹腔注射。免疫的具体实施方案在各实验室有所不同，可按自己的实验要求设计。
免疫脾细胞悬液的一般制备方法：将加强免疫后3天的小鼠用颈椎脱臼法处死，在无菌条件下取出脾脏；剔除脂肪和结缔组织，撕开脾包膜，用注射器内管将脾淋巴细胞轻轻挤压到培养液中；将脾细胞悬液移入离心管内，1 000 r／min离心5 min沉淀细胞，弃上清液；用4℃的0.91%NH4Cl溶液混悬沉淀的细胞，冰浴中静置5 min，使从脾脏释放出的红细胞破裂；加入基础培养液终止NH4Cl的作用，1 000 r／min离心5 min，弃上清液；再加入基础培养液重新悬浮沉淀的脾淋巴细胞，取样进行脾细胞计数。此即为待融合的脾淋巴细胞。
3）饲养层细胞
为防止细胞融合时因损伤而难以生长，促进杂交瘤细胞生长，增加克隆数，常需制备饲养层细胞。常用的饲养层细胞为小鼠腹腔巨噬细胞，该细胞有助于清洁培养表面和吞噬死亡细胞。
制备方法如下：用颈椎脱臼法处死2～3只小鼠，75%乙醇浸泡2 min消毒；无菌条件下在小鼠腹腔剪开一小口，从剪开的小口向腹腔注入基础培养液或无菌的PBS，反复冲洗腹腔，收集小鼠的腹腔冲洗液，离心，弃上清液；用HAT培养液稀释离心沉淀的细胞，调整细胞密度至1×105个／mL；此即为收集到的小鼠腹腔巨噬细胞悬液。将细胞悬液按每孔0.1mL加入96孔细胞培养板的各个孔中，置于37℃5%CO2饱和湿度的培养箱中培养过夜，备用。