10.2.2　细胞融合

制得含大量B细胞的脾细胞和骨髓瘤细胞后，一般采用PEG法进行细胞融合。文献中记载的方法有多种，在杂交瘤技术中采用的具体操作方法以及细胞混合的比例、融合剂的浓度等方面都可能有所不同。主要过程如下：(https://www.daowen.com)

将处于对数生长阶段的免疫脾淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞以一定比例混匀，离心，尽量吸净上清液，以免残液稀释PEG而降低细胞融合率。逐滴加入40%～50%的PEG后静置。然后加培养液终止PEG的作用，离心后弃上清液。用HAT培养液悬浮细胞，加到已含有饲养层细胞的细胞培养板内，置37℃5%CO2饱和湿度的培养箱中培养。每隔3天更换1／2 HAT选择培养液。用倒置显微镜观察融合细胞的生长情况，融合细胞一般在3～6天开始形成克隆，其余细胞则逐渐死亡。