3.7.1　构建大容量载体的必要性

当需要克隆真核生物基因组，尤其是高等的植物、动物基因组时，由于其基因组非常庞大，往往需要克隆数百甚至数千kb的DNA片段，这时就需要更大承载量的克隆载体。因此，人工染色体（artificial chromosome）在这种需求条件下诞生。这种高承载量的克隆载体的设计是基于细胞染色体能够稳定复制和遗传的原理。因此，可以将人工载体概括为含有天然染色体基本功能单位的载体系统。实验室常用的人工染色体包括酵母人工染色体（YAC）、细菌人工染色体（BAC）、哺乳动物人工染色体（MAC）和人类游离人工染色体（HAEC）。这些人工染色体主要用于基因组图谱制作、基因分离以及基因组序列分析，而且在基因治疗领域有很好的应用前景。当较大的外源DNA片段和人工染色体重组成功后，通过电穿孔技术导入宿主细胞，重组体在宿主细胞内作为一条独立的染色体进行复制和分裂，因此，不存在插入宿主染色体所引起的宿主基因的插入失活或抑制外源基因表达的位置效应，每个细胞中保持一个拷贝的外源DNA片段。