5.4.4　目的cDNA克隆的筛选和鉴定

从cDNA文库中筛选和鉴定目的cDNA的方法主要有核酸分子杂交和免疫学检测分析等方法，具体可参见本书6.3“重组体克隆的筛选与鉴定”内容。这里主要介绍差别杂交（differential hybridization），又叫差别筛选（differential screening），它适用于分离在特定组织细胞或发育阶段表达的、受生长因子调节的或药物诱导表达的基因。

差别杂交是寻找两组不同状态细胞的基因表达差异，一组细胞群体中目的基因正常表达，另一组细胞群体中目的基因不表达。如图5-14所示，以表达目的基因细胞总mRNA构建cDNA文库，该文库影印培养，制备两份滤膜。从两组的mRNA提取物分别制备cDNA并标记为探针，与文库的两份滤膜杂交。当使用存在目的基因的cDNA探针时，所有包含重组体的菌落呈阳性反应，而使用不存在目的基因的cDNA探针时，除目的基因的菌落外，其余菌落呈阳性反应，比较这两组滤膜并对照原始平板，可挑选出含目的基因的菌落，供进一步鉴定。

差别杂交是一种分离受诱导表达的基因的方法，不需要目的基因的序列信息，可有效地分离经特殊处理而诱发表达的基因。但它也存在局限性：灵敏度比较低，不适宜分离某些低丰度mRNA的基因。