6.3.10　基因表达产物分析法

该法用于鉴定产物是否确是目的基因的产物。从产物的鉴定结果也可以进一步证明所克隆的DNA段或分离的mRNA是不是目的基因片段或其mRNA。

常用体外转译法对基因产物进行鉴定。从细胞中提取的天然mRNA或通过克隆化的DNA在体外转录产生的mRNA，在无细胞提取液中能被翻译而合成蛋白质，这些体外翻译反应产物可通过免疫沉淀或SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳加以分析鉴定。对原核生物的基因产物进行鉴定，常用大肠杆菌或枯草芽孢杆菌无细胞系统，而对真核生物基因产物进行鉴定，则常用兔网织红细胞裂解液或麦胚提取物，这两种翻译药盒均有厂商出售。

以RNA在网织红细胞裂解液中的翻译为例，翻译的标准反应混合物含有：①翻译反应混合液（含亚精胺、磷酸肌酸、除甲硫氨酸外的所有氨基酸、二硫苏糖醇、HEPES、水）；②KC1、乙酸镁；③［35S］-硫氨酸；④小球菌核酸酶处理的网织红细胞裂解液；⑤RNA。上述反应混合物于30℃温育1h后，即可分析鉴定其体外翻译产物。