核酸的分离、纯化与鉴定
细胞中的DNA主要存在于细胞核和线粒体中,RNA主要存在于细胞核和细胞质中。DNA是一种长线性分子,相对稳定,可以在纯化过程中通过机械剪切而断裂。线粒体DNA是一种环状分子,一般需要以线粒体为起始物质,才能获得高纯度的线粒体DNA。RNA不稳定且广泛存在,因此在纯化过程中应注意防止RNA酶降解RNA。核酸的高度负电荷磷酸骨架使其比细胞中的其他成分更亲水,可通过选择性沉淀和差速离心分离。(https://www.daowen.com)
离心、沉淀、分离、纯化的DNA和RNA可以通过凝胶电泳直接判断其纯度、完整性及片段大小。核酸电泳常用的支持体为琼脂糖与丙烯酰胺。与蛋白质电泳相比,核酸电泳更简单,因为核酸分子中的每个单核苷酸都带有一个负电荷,在碱性条件下向阳极移动,故可以按照其碱基数的多少被有效分离。建立在琼脂糖凝胶电泳基础上的印迹杂交技术,如Southern印迹杂交技术和Northern印迹杂交技术,能够定量检测基因表达变化,也是分子细胞生物学研究中常用来鉴定核酸的方法。