一、菌种制作

一、菌种制作

长期采用无性繁殖及多次转管的蛹虫草菌种种性易变异，表现为子实体畸形、产量下降。因此，在生产中应定期对蛹虫草菌种进行有性繁殖，选育菌丝生长健壮、菌龄短、无杂菌、色泽正、转色快、出草块而整齐、高产、优质、易发生子座、早熟的菌种。

（一）母种分离

选择新鲜的蛹虫草子实体，用毛笔蘸清水擦洗外表，用75％酒精进行表面消毒3～5 min，无菌水清洗干净后，置盛有灭过菌的PDA培养基的三角瓶上方悬空，在28～32℃下静置培养。待培养基表面出现星芒状虫草菌落时，在接种箱内挑取单个或多个菌落置斜面培养基上培养。待虫草菌丝长好后再提纯。通过提纯获得母种，经出草比较试验，选优质虫草子实体再进行一次组织分离，经筛选后方可用于转扩原种和栽培种。

母种选育也可用组织分离法。选新鲜蛹虫草，进行表面消毒后，把子座纵向撕开，用经消毒的解剖刀，于无菌条件下在子座的基部中心切取3 mm×1 mm的白色菌肉组织，接在加有50 μg/mL链霉素的加富培养基PDA培养基试管斜面上，于20℃的恒温箱中培养10 d左右，菌丝即可长满斜面。菌丝纯白，粗壮浓密，紧贴培养基生长，边缘清晰，后期分泌浅黄色色素。

（二）菌种检验

分离的母种或购来的母种，都要进行检验。将母种扩大培养后，接种在大米培养基上，于23～25℃下培养20～30 d，观察生长情况。若已纯化无杂菌污染，再继续培养1个月，即有橙红色子座产生，说明菌种纯正可靠，才可扩大培养应用于生产。

（三）原种和栽培种制作

1.固体菌种　固体菌种常用以下培养基：（1）米饭培养基。将大米用水浸泡24 h，捞出后放在锅内煮30 min。

（2）大米50 g，磷酸二氢钾0.05 g，葡萄糖10 g，维生素B10.5 g，水50 mL。

（3）大米10 g，木屑88 g，蔗糖1 g，石膏1 g，米汤60 mL。(https://www.daowen.com)

常规制备，高压灭菌，灭菌接种后置于23～25℃下暗光培养。20～30 d菌种即可长满瓶。

2.液体菌种　生产中，蛹虫草的人工培养，多采用液体菌种接种，其培养液配方如下：

（1）玉米粉20 g，葡萄糖20 g，蛋白胨10 g，酵母粉5 g，磷酸二氢钾1 g，硫酸镁0.5 g，水1 000 mL，pH值为6.5。

（2）马铃薯200 g，玉米粉30 g，葡萄粉20 g，蛋白胨3 g，磷酸二氢钾1.5 g，硫酸镁0.5 g，水1 000 mL，pH值为6.5。

（3）葡萄糖10 g，蛋白胨10 g，蚕蛹粉10 g，奶粉12 g，磷酸二氢钾1.5 g，水1 000 mL，pH值为6.5。

（4）玉米粉30 g，磷酸二氢钾1 g，硝酸钠1 g，水1000 mL，pH值为6.5。

用500 mL锥形瓶，每瓶装培养液100～200 mL，棉塞封口，0.101 MPa灭菌30 min。冷却后接入母种，每支母种接5～6瓶，静置24 h后，置于往复式摇床上120r/min、7～9 cm振幅、23～25℃振荡培养4～6 d后备用。如果继续扩大培养，接种量10％，上述条件培养4～6 d。培养好的液体菌种培养液深棕色，有大量的菌丝球和浓郁虫草香味。

（四）制种和栽培时间

蛹虫草子座发生最适温度为20～23℃，以此为准往前推1个半月进行播种。再往前推1个月制栽培种。制种时要严格把关，选菌苔底部呈鲜黄色且厚薄适中，平伏基面，无明显白色绒毛状气生菌丝、无杂菌污染的菌种。如是液体菌种，菌龄不超过7 d。

蛹虫草人工培养，目前都以大米、玉米渣、高粱米作为主料进行固体培养，多以瓶栽为主，也有以蚕蛹为原料进行畦床栽培的。