实训10 微生物群体形态的观察（二）——微生物 的载玻片培养
实训10 微生物群体形态的观察（二）——微生物 的载玻片培养
一、实训目的
（1）学会用微生物的载玻片培养法培养丝状真菌。
（2）观察青霉、曲霉等霉菌的发育过程和各自的形态特征。
二、实训原理
丝状真菌即霉菌，它的形态分为基内菌丝、气生菌丝和繁殖丝。霉菌的基内菌丝深入培养基内部，使得霉菌的菌落难以挑起，很难获得完整的菌体进行观察，所以常用的细菌的形态观察方法不适合于丝状真菌。另外，真菌较细菌大，借助低倍和高倍显微镜结合较好的培养方法即可完成形态的观察。
微生物的载玻片培养即真菌的载玻片培养，适用于观察丝状真菌及假丝酵母菌生长全过程。此法是将丝状真菌的孢子（或菌体）接种至载玻片后，滴加培养基（或者在制好的小琼脂培养基块上接种），加盖盖玻片，轻压之（在载玻片和盖玻片的狭窄空间内形成让菌体仅能横向伸展的环境），再放在湿室中适温培养。在培养过程中，可随时取出用显微镜观察菌体生长的全过程，如孢子的萌发、菌丝的生长及孢子的形成等各个阶段。本实训以产黄青霉及黑曲霉为代表介绍微生物的载玻片培养。
续表
三、实训器材
1．菌种
产黄青霉（Penicillium chrysogenum），黑曲霉（Aspergillus niger）。
2．培养基
制备马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基。
配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，蒸馏水1000mL，自然pH。
制法：马铃薯去皮后切成小块，加水煮烂（煮沸20～30min，能被玻璃棒戳破即可），用4层纱布过滤，再加糖和琼脂，加热熔化后再补足水分至1000mL，121℃下灭菌20min。
3．试剂
20%甘油。
4．器具
培养皿，载玻片，盖玻片，“U”形玻璃搁架，镊子，解剖刀，解剖针，接种环，酒精灯，圆形滤纸，显微镜等。
四、实训步骤
1．准备湿室
在培养皿的底部铺一张略小于底部的圆形滤纸，其上放置一“U”形玻璃搁架、一块洁净的载玻片、两块盖玻片，盖上皿盖，用纸包好后，121℃下灭菌20min，60℃烘干备用。
此培养皿为载片培养室，即湿室（图3－12）。可准备数套，以便于后期挑取制备好的标本片进行观察。(https://www.daowen.com)
图3－12 载片培养湿室示意图
1—培养皿；2—玻璃搁架；3—盖玻片；4—琼脂块；5—载玻片；6—保湿滤纸
2．琼脂块的制作
取已灭菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基6～7mL，注入已灭菌的培养皿中，使之凝固成薄层。用解剖刀切成两块0．5～1cm2的小块培养基，将其置于上述培养室中载玻片的两端。制作过程注意无菌操作。
3．准备菌种
从冰箱中取出产黄青霉、黑曲霉的斜面培养物，室温放置。
4．接种
用解剖针挑取少量的孢子接种于培养基块的边缘，用无菌镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上。
注意无菌操作，接种量要少，孢子要接种在培养基块的边缘，否则培养后菌丝体过于稠密影响观察。
5．倒保湿剂
每皿倒入约3mL 20%的无菌甘油，使皿内的滤纸完全润湿，以保持皿内适宜的湿度，防止载玻片培养中小琼脂块干裂，并有利于霉菌菌丝体的正常生长繁殖。操作完毕后，在盖上注明所接种的菌名、组别和接种日期。
6．恒温培养
将制备好的培养皿湿室在28℃的条件下恒温培养。
7．镜检绘图
在不同的培养时间内取出湿室载玻片，放在低倍镜和高倍镜下观察霉菌不同时期的形态并绘图。
五、结果记录
绘图说明产黄青霉和黑曲霉的形态特征，并注明各部位名称。
六、思考题
（1）根据自己的操作体会，请增加以上操作的注意要点。
（2）根据载玻片培养观察方法的基本原理，你认为以上操作过程的哪些操作步骤可以根据具体情况做一些改进？
