实训12　微生物群体形态的观察（四）——根霉假根的观察

实训12　微生物群体形态的观察（四）——根霉假根的观察

一、实训目的

（1）学会用培养皿法制备假根的观察标本。

（2）观察根霉假根及各部分的形态特征。

二、实训原理

根霉与毛霉属于毛霉目，根霉中最常见的是匍枝根霉，又称黑根霉。根霉的菌丝无横隔，主要由菌丝、假根、孢子囊梗和孢子囊等组成。其中在基质表面横生的菌丝叫匍匐菌丝，匍匐菌丝膨大的地方向下生出假根，伸入基质中以吸取营养；向上生出数条直立的孢囊梗，其顶端膨大形成孢子囊，囊的中央有一半球形的囊轴（columella），囊轴基部有稍膨大的囊托。根霉中的假根和匍匐菌丝有别于毛霉，是根霉、梨头霉等少数霉菌特有的结构（图3－13）。

图3－13　根霉的形态及假根

根霉假根的培养皿观察方法是由复旦大学生物学系的强义国等老师设计的。其原理是根霉的气生菌丝在遇到培养基以外的障碍物（如培养皿的盖子和皿内放置的载玻片等物）时也会很好地附着并分化形成假根，并在假根节上正常地生出孢子囊梗和孢子囊，还能观察到两个假根间的匍匐菌丝。本实训以黑根霉为代表介绍根霉假根的观察方法。

三、实训器材

1．菌种

黑根霉（Rhizopus nigricans）斜面培养物。

2．培养基

PDA培养基。

3．固定液

乳酸苯酚固定液：结晶苯酚10g，乳酸10g，甘油20g，蒸馏水10mL。

4．器具

培养皿，盖玻片，载玻片，镊子，接种环，显微镜，玻璃搁架等。

四、实训步骤(https://www.daowen.com)

1．倒平板

将灭菌的PDA培养基熔化，冷却至50℃左右倒平板，凝固备用。培养基的倾倒量为培养皿的1／2左右。

2．接种

用接种环在酒精灯火焰旁蘸取根霉孢子，在琼脂平板表面划线接种。

3．放载玻片

在培养皿内放一“U”形玻璃搁架，在其上放置一块灭菌好的载玻片。放置“U”形玻璃搁架的目的是缩短培养基表面与载玻片的距离，以便减少假根制片培养的时间（图3－14）。

图3－14　根霉培养示意图

4．培养

将培养皿倒置，于28℃培养2～3天后，可见根霉的气生菌丝倒挂成胡须状，有许多菌丝与载玻片接触，并在载玻片上分化出假根和匍匐菌丝等结构。

5．镜检

将培养根霉假根的培养皿打开，取出皿盖内的载玻片标本，使附着菌丝体的一面朝上，在显微镜下观察。用低倍镜就能观察到假根及从假根节上分化出的孢子囊梗、孢子囊、孢囊孢子和两个假根间的匍匐菌丝。

由于假根和其他构造不是处在同一视野上，观察时注意调节焦距以看清各层次构造。若在载玻片的少量假根及孢子囊梗等培养物上滴加乳酸苯酚固定液，再盖上盖玻片，就能在同一视野中观察除假根以外的孢子囊、囊轴和匍匐菌丝等构造。

五、结果记录

绘图说明你所观察到的根霉的各种形态特征。

六、思考题

本实训中观察假根的设计原理是什么？此设计还适合于培养哪类菌？