粪便化学检查
第五节 粪便化学检查
一、隐血试验
隐血试验（occult blood test，OBT）是指消化道出血量少，肉眼不见血色，而且少量红细胞又被消化分解，以至显微镜下也无从发现的出血。目前主要采用化学法、免疫单克隆抗体法。
（一）免疫学检测法
1．原理
为了提高粪便隐血试验的特异性、准确性，防止上述诸多因素对实验的影响，临床逐渐开展了免疫学方法，如免疫单项扩散法、对流免疫电泳法、酶联免疫吸附法、免疫斑点法及胶乳免疫化学凝聚法、放射免疫扩散法等。目前，国内外多采用单克隆抗体免疫胶体金法，胶体金是由氯化金和枸橼酸合成的紫红色胶体物质。胶体金与羊抗人Hb单克隆抗体和鼠Ig G吸附在特制的醋酸纤维膜上，再在试带上端包被羊抗人Hb多抗和羊抗鼠Ig G抗体。检测时将试带下端浸入粪便悬液中，通过层析作用，悬液沿着试带上行。如果粪便中含有Hb，则Hb在上行过程中与胶体金标记羊抗人Hb单抗人结合，待行至羊抗人Hb多抗标记处时，形成金标记羊抗人Hb单抗—粪Hb—羊抗人Hb多抗复合物，在试带上显现一条紫红色线（为检测线，被检测标本阳性）；试带上无关的金标记鼠Ig G随粪便悬液上行至羊抗鼠Ig G时，与之结合形成另一条紫红色的线，为试剂质控对照线。免疫学方法具有较高的灵敏度，一般血红蛋白为0.2mg/L或0.03mg/g粪便就可获得阳性结果。各种动物血红蛋白在500mg/L，辣根过氧化物酶在2000mg/L时，对本实验无干扰，故不需限制正常饮食。由于免疫学方法具有快速、方便、特异等优点，多用于大肠癌的普查。尽管免疫学方法有其优点，但在临床使用中有时也可出现假阳性或假阴性。①红细胞在肠道停留时间过久，如上消化道出血时血红蛋白被消化酶及细菌充分分解后不再具有原来的免疫原性，可出现假阴性。②出血过多，血红蛋白浓度过高造成的所谓“后带现象”，与单克隆抗体不匹配，亦可出现假阴性结果。若遇肉眼观察粪便外观呈柏油样便，而免疫法隐血试验阴性或弱阳性，可将粪便稀释50～100倍后重复试验，或用化学法进行对比分析。
2．操作
取一个洁净小塑料杯，滴加2～3滴蒸馏水，取粪便小许，调成均匀混悬液。取便隐血试纸条，按说明书操作，将试纸条的反应端浸湿。在5min内观察结果。若反应线（T）和质控线（C）同时呈蓝色色带即为阳性；若只有C线呈色为阴性；若T线与C线均不显色，说明试验无效。
3．临床意义
（1）消化道出血时（如溃疡病、恶性肿瘤、肠结核、伤寒、钩虫病等）本试验可阳性。
（2）消化道恶性肿瘤时，粪便隐血可持续阳性，溃疡病时呈间断性阳性。
（3）本法可作为消化道恶性肿瘤普查初筛试验。
4．临床经验
（1）本法可以帮助医生早期发现胃肠道病变，然而，由于家族性息肉或直肠癌可能不出血，或间断性出血，或出血在粪便中分布不均匀，都可造成阴性结果。
（2）本法对正常人检验有时也会得到阳性结果，这是由于某种刺激胃肠道的药物造成便潜血所至。
（3）本检验法只能作为筛选或辅助诊断用，不能替代胃镜、直肠镜、内镜和X线检查。
（二）邻甲联苯胺法
化学法隐血试验是目前较少采用的方法。供选用的方法有邻联甲苯胺法、邻甲苯胺法、还原酚酞法、联苯胺法、氨基比林法、无色孔雀绿法、愈创木酯法等。邻联甲苯胺法、邻甲苯胺法、还原酚酞法最灵敏，可检出0.2～1mg/L的血红蛋白，只有消化道有1～5ml出血就可检出。还原酚酞法由于试剂不稳定，放置可自发氧化变红而被摒弃。邻联甲苯胺法常容易出现假阳性。中度灵敏的实验包括联苯胺法、氨基比林法、无色孔雀绿法，可检出1～5mg/L的血红蛋白尿，消化道有5～10ml出血即为阳性。联苯胺法由于有致癌性而被淘汰，无色孔雀绿法在未加入异喹啉时灵敏度差，需6～10mg/L血红蛋白才能检出，此时消化道出血可达20ml，假阳性少，若此法为阳性基本可确定消化道有出血。
1．原理
血红蛋白中的亚铁血红蛋白有类似过氧化物酶的活性，能催化过氧化氢，放出新生态氧，将受体邻甲苯胺氧化成邻甲偶氮苯而显蓝色。
2．试剂
（1）10g/L邻甲联苯胺（o-tolidine）溶液：取邻甲联苯胺1g，溶于冰醋酸及无水乙醇各50ml的混合液中，置棕色瓶中，保存于4℃冰箱中，可用8～12周，若变为暗色，应重新配制。
（2）3%过氧化氢液。
3．操作
（1）用竹签挑取少量粪便，涂在消毒棉签上或白瓷板上。
（2）滴加0.15L/L邻甲苯胺冰乙酸溶液2～3滴于粪便上。
（3）滴加3%过氧化氢2～3滴。
（4）立即观察结果，在2min内显蓝色为阳性。
4．结果判断
－：加入试剂2min后仍不显色
+：加入试剂10s后，由浅蓝色渐变蓝色。
2+：加入试剂后初显浅褐色，逐渐呈明显蓝褐色。
3+：加入试剂后立即呈现蓝褐色。(https://www.daowen.com)
4+：加入试剂后立即呈现蓝黑褐色。
5．临床经验
（1）粪便标本必须及时检查，以免灵敏度降低。
（2）3%过氧化氢必须有效，应进行阳性对照试验，将过氧化氢滴血片上，产生泡沫，或滴加于重铬酸钾硫酸液，显褐色示有效。
（3）强调实验前3d内禁食动物血、肉、肝脏及富含叶绿素食物、铁剂、中药，以免假阳性反应。齿龈出血、鼻出血、月经血等均可导致阳性反应。
（4）用具应加热处理（如试管、玻片、滴管等），以破坏污染的过氧化物酶。
（三）愈创木酯法
1．原理
愈创木酯（gum guaiacum）在血红蛋白类似过氧化物酶反应中可作为受氧体，被氧化而显蓝色。
2．试剂
愈创木酯饱和溶液：称取愈创木酯粉末2g，溶于95%乙醇100ml内。
3．操作
取粪便一小块，涂于白瓷板或玻片上，滴加愈创木酯饱和溶液1滴，冰乙酸及3%过氧化氢各1滴，30s内显蓝色或蓝绿色为阳性，显其他颜色或30s以后显色为阴性。
二、粪胆素检查
重点介绍氯化汞煮沸法。
1．原理
粪便内存在粪胆素时，加入氯化汞则生成红色化合物。
2．试剂
饱和氯化汞溶液：氯化汞5g，氯化钠0.5g，蒸馏水加至100ml。
3．操作
（1）于小试管内置粪便一小块，加饱和氯化汞溶液数毫升。
（2）将粪块调匀，加热煮沸3min，立即观察反应。
（3）如含粪胆素，粪粒可呈红色，不显红色者为阴性。正常粪便应为淡红色。如含有未改变的胆红素，则可被氧化为胆绿素，粪便呈绿色。
4．结果判断
阴性：煮沸后粪渣不显红色。
弱阳性（+）：煮沸后粪渣呈粉红色。
阳性（2+）：煮沸后粪渣明显红色。
5．临床意义
（1）正常时多为阳性。
（2）胆道梗阻时，粪便中的粪胆素减少或消失；不全梗阻时，可呈弱阳性；完全梗阻时呈阴性。
6．临床经验
（1）结果不易判定时，应注意粪便颜色，必要时以盐水代替试剂做空白对照。
（2）当粪便颗粒经煮沸后如有红色又有绿色出现，说明标本内既含粪胆素又含有胆红素，常见于肠炎、腹泻等。