显微镜检查

第三节 显微镜检查

一、涂片检查

精液液化后充分混匀制成压滴片，筛检有无精子及精子能否运动。若未查到精子，尚须制备浓缩标本离心法复检。如仍查不到精子，则可判定为无精子症；若仅见少量精子，则称为精子缺乏；若查到的精子全部不运动，则可能为死精子症，但须经体外活体染色检查方能确定。

涂片检查也是检查输精管结扎效果的常规方法。一般于术后经5～6次射精，原贮于附睾和精囊内的精子已排净。通常于术后第六周开始检查。每周1～2次。若连续三次查不到精子则可认为手术成功，否则说明手术失败。

二、精子活动率

取新鲜标本混匀后，在温玻片上用高倍镜观察100个精子，计数活动精子与不活动精子的比例，计算精子活动的百分率。

精子活动率=活动镜精子数÷（活动精子数+不活动精子数）× 100%

1．参考值

在排精30～60min内，应有70%以上精子为活动精子。

2．临床经验

如室温低于10℃时，应将标本先放入37℃温育5～10min后镜检。

三、精子活动力

1．精子活动力报告

取上述新鲜湿片标本，观察精子的活动力，可按下列五级报告：

（1）0级：无活动力，加温后仍不活动。

（2）Ⅰ级：不良，精子原地旋转、摆动或抖动，运动迟缓。

（3）Ⅱ级：较好，精子活动方向不明确，不呈直线运动，也不活泼。

（4）Ⅲ级：为中速运动。

（5）Ⅳ级：良好，为快速直线运动，很快超越一个视野，运动活泼。

2．临床意义

精子活动力与受精的关系十分密切。精子活动力低下，难以抵达输卵管或无力与卵子结合而不能完成受精过程。A级活动力的精子量不足也会影响受精率。若连续检查，精子存活率不足40%，且以C级活动力精子为主，则可能成为男性不育的原因之一。

精子活动力下降见于：

（1）精索静脉曲张，由于静脉血回流不畅，导致阴囊内温度升高及睾丸组织缺氧，使精子活动力下降。

（2）生殖系非特异性感染以及使用某些抗代谢药、抗疟药、雌激素、氧氮芥等时。

四、精子计数

1．试剂

精子稀释液，碳酸氢钠5g，40%甲醛溶液1ml，蒸馏水100ml，待完全溶解过滤后使用。

2．操作

（1）于小试管内加精子稀释液0.38ml，吸液化精液20μl，加入稀释液内摇匀。

（2）充分摇匀后，滴入血细胞计数池内，静置1～2min，待精子下沉后，以精子头部作为基准进行计数。

（3）如精子数少，可计数2个大方格内精子数，数得总数乘10万即为每毫升精液内精子数，再换算成×109/L报告。

（4）如精子数多，可计数5个中方格内精子数，加6个零，即为每毫升精液内精子数，再换算成×109/L报告。

3．参考值

正常男性（10～130）×109/L。

4．临床经验

（1）收集精液前避免性生活3～7d。收集精液标本后应在1h内检验，冬季应注意保温。

（2）出现一次异常结果，应隔一周后复查，反复查2～3次方能得出比较正确的结果。(https://www.daowen.com)

（3）如低倍镜、高倍镜检查均无精子，应将精液离心沉淀后再涂片检查，如两次均无精子，报告“无精子”。

5．临床意义

精子数量减低可见于：

（1）精索静脉曲张。

（2）有害金属和放射性损害。

（3）先天性和后天性睾丸疾病（如睾丸畸形、萎缩、结核、淋病、炎症等）。

（4）输精管、精囊缺陷。

（5）老年人在50岁以上者精子生成减少。

五、精子形态观察

（一）检测方法

（1）湿片法。高倍镜观察。

（2）染色法。涂薄片→干燥→固定→染色→油镜观察。

（二）精子形态学

1．正常精子形态检测应遵循严格标准

（1）正常精子头部呈椭圆形，其正常标准为头部长度为4.0～5.5μm，宽为2.5～3.0μm，长与宽的比值为1.5～1.75，颈体区占头部的40%～70%。

（2）必须不存在颈、中段或尾部的缺陷。

（3）细胞质微粒不大于正常头部的1/3。

（4）将所有处于边缘异常状态的精子均列为不正常。

2．有缺陷精子

（1）头部形状、大小缺陷。包括大头、小头、锥形头、梨头、无定形头、空泡样头（头部大于20%区域出现不着色的空泡区）、双头或以上缺陷的联合体。

（2）颈、中段缺陷。包括缺尾可见到游离或脱落的头部，未附着或弯曲尾，尾与头部长轴结呈90度角，肿胀、不规则、弯曲的中段，异常薄的中段无线粒体鞘或以上任何类型缺陷的联合体。

（3）尾部异常。包括短尾、多尾、发夹状尾、断尾、宽度不规则或卷尾或尾部伴有末端微滴，或以上任何类型缺陷的联合体。

（4）细胞质微粒。大于正常头部的面积的1/3。细胞质微粒一般位于颈可中段部分，也有未成熟精子微粒沿尾部分而布在不同部位。

（三）参考值

正常人精液中异常精子应少于20%，如超过20%为不正常。

（四）临床意义

异常形态精子增多见于生殖系感染、精索静脉曲张、雄激素异常、某些药物、遗传等。

（五）方法学评价

（1）涂片法。简便、快速，结果偏差大。

（2）染色法。复杂、费时，准确可靠，重复性好，为WHO推荐方法。主要为革兰或瑞氏染色，方法同细胞形态学和细菌学检验。

六、细胞

（1）未成熟生殖细胞。即生精细胞，包括精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞核发育不完全的精子细胞。正常＜1%当睾丸曲细精管基膜异常、受到药物或其他因素印象或损害时，为成熟生殖细胞增多。

（2）红细胞、白细胞、上皮细胞。精液中可见少量白细胞和上皮细胞，偶见红细胞。当白细胞＞5个/HP为异常，见于前列腺炎、精囊炎或附睾炎等。白细胞数＞1×109/L称为脓精症或白细胞精子症，可致男性不育。红细胞增多见于炎症、结核或恶性肿瘤。

（3）癌细胞见于生殖系统恶性肿瘤。

七、其他成分

精液中可以有结晶体、卵磷脂小体、淀粉样体、脂滴、脱落上皮细胞等。