羊水病原生物学检查
第五节 羊水病原生物学检查
一、羊水风疹病毒感染的检测
1．目前常用检测方法
有病毒的分离培养、血凝集抑制实验、风疹特异性lg M测定、基因检测等。如有可疑胎儿感染，可采取羊水或胎儿血选用以上方法进行检测诊断。目前检测量灵敏的方法是采用聚合酶链反应（PCR）方法，该方法灵敏度高，特异性强，能检测0.15fg、约6个基因拷贝的DNA分子。用PCR扩增在感染后6h即能做出诊断，更有利于风疹感染的早期快速诊断。有关风疹的国际会议上曾明确规定：控制风疹的原则是预防胎儿感染，开展对孕妇的监测，防止先天性风疹综合征，努力实现优生目标。
原理：采用捕获法原理检测人血清或血浆标本中人类风疹病毒Ig M抗体。微孔中预包被鼠抗人-Ig M，首先加入待检标本，标本中的Ig M抗体都可与包被孔中鼠抗人-Ig M结合，未结合成分被洗去，加入酶标记的风疹病毒基因重组抗原，已结合的Ig M抗体中的风疹病毒Ig M抗体与酶标抗原结合，洗去未结合成分，最后用TMB底物显色。通过酶标仪检测吸光度从而判定标本中的抗体存在与否。
2．临床意义
孕妇风疹病毒感染可致胎儿先天畸形，发育异常，并可引起远期有害效应。受感染孕妇的宫内风疹病毒感染率为29%～49%，明显随胎龄增长而变化。如胎龄＜12周，为80%；12～16周，为56%～67%；24～28周为12%；28～36周约为19%。在妊娠后期风疹病毒感染率又明显上升，可达58%～100%。这可能与不同胎龄胎盘屏障改变有关。胎龄12周前易感染，胎儿发生易识别的缺陷高达30%～40%。特别是胎龄4周内感染，50%胎儿发生畸形；16周后感染，胎儿受损较小。妊娠早期胎儿感染风疹病毒后，体液免疫和细胞免疫受到损害，引起免疫功能下降。病毒侵犯胎儿在组织内进行细胞有丝分裂，致使染色体受损，发生断裂，数目增多及存在可溶性有丝分裂抑制因子，干扰细胞的增殖分裂，阻碍胎儿正常发育、器官形成和分化，导致各种各样的胎儿畸形，也可引起细胞溶解，胎盘病变。特别是在胎儿发育期感染，多引起胎盘血管炎，血管内膜下纤维增生，使胎儿小血管变狭窄，甚至栓塞，从而影响胎儿组织供血不足，产生先天性血管畸形或胎儿宫内发育迟缓。受孕前感染风疹病毒，胎儿畸形危险率较低。但风疹感染后2～4个月应避免怀孕，利于优生。
孕妇在孕期1～2周感染风疹病毒，30%～80%胎儿有严重畸形危险。孕妇在孕期12～16周感染风疹病毒，10%～20%胎儿有智力障碍或听力缺陷的危险。孕妇在17～18周感染风疹病毒， 10%胎儿有智力障碍或听力缺陷的危险。18周后感染风疹病毒，胎儿危险率很低。
二、羊水巨细胞病毒感染的检测
1．检测方法
目前巨细胞病毒的检测方法主要依靠细胞学检查、病毒分离、血清学检查及聚合酶链反应（PCR）方法等。以上任何检测均可诊断，羊水、胎儿脐血及早孕绒毛组织均可作为产前诊断的材料。目前采用PCR技术方法，在感染后6h即能做出诊断，更有利于早期诊断。(https://www.daowen.com)
原理：采用捕获法原理检测人血清或血浆标本中人类巨细胞病毒Ig M抗体。微孔中预包被鼠抗人-Ig M，首先加入待检标本，标本中的Ig M抗体都可与包被孔中鼠抗人-Ig M结合，未结合成分被洗去，加入酶标记的巨细胞病毒基因重组抗原，已结合的Ig M抗体中的巨细胞病毒Ig M抗体与酶标记抗原结合，洗去未结合成分，最后用TNB底物显色。通过酶标仪检测吸光度从而判定标本中的抗体存在与否。
2．临床意义
巨细胞病毒是疱疹病毒的一种，能通过胎盘感染胎儿。人群感染率非常高，因这种病毒在潜伏期或活动期均可危及胎儿，世界卫生组织于1985年将该病毒列为引起新生儿缺陷的最主要的病原体。胎儿感染及受累程度与孕妇感染时的孕期有关。孕早期宫内感染，胎儿感染后，新生儿有巨细胞病毒感染。孕晚期感染，此时胎儿已发育完善，因此受累较少。
三、羊水弓形体检查
1．检测方法
羊水弓形体的方法，可以直接在显微镜（400～2万倍）下观察。采取羊水最好离心，取沉淀涂片，血液可用1滴血加盖片观察，还可荧光染色。在弓形体生活周期中，有三个虫期用显微镜、超高倍镜（2万倍）容易观察到；急性感染期观察到为滋养体；恢复其或慢性期观察到为包囊；从猫便排出者为囊合子。
PCR方法可检测弓形虫病原体DNA，具有特异性强、敏感度高、简便、快速等优点，便于广泛应用。
原理：采用捕获法原理检测人血清或血浆标本中人类弓形体Ig M抗体。微孔中预包被鼠抗人-Ig M，首先加入待检标本，标本中的Ig M抗体都可与包被孔中的鼠抗人-Ig M结合，未结合成分被洗去，加入酶标记的弓形体基因重组抗原，已结合的Ig M抗体中的弓形体Ig M抗体与酶标抗原结合，洗去未结合成分，最后用TMB底物显色。通过酶标仪检测吸光度从而判定标本中抗体的存在与否。
2．临床意义
弓形体是一种球虫，感染人、畜引起的传染病称为弓形体病。该病分为获得性和先天性两种。先天性弓形体病，系母亲在孕期受感染后，弓形体经胎盘感染胎儿，对胎儿损害严重。可造成多种畸形，如小头畸形、脑积水、视力障碍、智力发育缺陷等不良后果。孕妇感染虽不表现出明显症状，却可引起胎儿的不良结局。如流产、早产、死胎和严重畸形，甚至给患者造成神经系统障碍或造成死亡。
人类可通过进食未充分加热而含有弓形体的肉类、蛋品等食品，或密切接触猫、狗动物和手感染材料，以及通过输血或器官移植而感染。孕妇初次感染弓形体才能传给胎儿，母亲感染虫体经过两次增殖后到达子宫壁，通过胎盘进入胎儿血循环感染胎儿。如母亲在孕前已有弓形体隐性感染，由于妊娠的额外负担使弓形体病灶活动化，诱发体内包囊破裂，导致虫血症感染胎儿或潜伏在子宫肌肉内的包囊随子宫壁伸展或胎盘侵蚀子宫时使其破裂，从而使虫体侵入胎盘感染胎儿。虫体除经胎盘途径外，还可经羊水进入胎儿胃肠道使其感染。