洋葱细胞质雄性不育相关分子标记

（一）洋葱细胞质雄性不育细胞质分子标记　洋葱雄性不育细胞质类型的分子标记经历了两个阶段：限制性片段长度多态性标记和基于特定基因的PCR标记。Courcel等（1989）最早采用RFLP法对S和T型不育系的线粒体和叶绿体基因进行研究，获得了可以区别洋葱S型和T＆N型的细胞质RFLP标记。随后这种方法被Holford等（1991b），Havey（1993）和Satoh等（1993）应用并使用了更多的限制性酶和探针，证明了不育系细胞质中存在与保持系和恢复系不同的序列多态性，并把这些分子标记用来鉴定洋葱雄性不育系胞质类型。随着分子生物学的发展，研究者又建立了基于线粒体（Satoh，1998）和叶绿体（Havey，1995；Kwang-Soo et a1.，2006）特定基因变异的快速PCR鉴定方法，并且他们所建立的标记在不同的细胞质基因上。由此可见洋葱雄性不育细胞质基因变异分布的广泛性。由于T型不育系与正常可育系在细胞质基因上差异很小，用以上研究者的方法无法区分开来。Engelke等（2003）报道通过PCR方法分别对线粒体cob基因和orfA501阅读框进行扩增，结合这两个基因扩增产物的多态性，可以将S、T和N型三种胞质区分开来。

（二）洋葱细胞质雄性不育恢复基因的分子标记　洋葱细胞基因组的巨大性和遗传的复杂性（Labani＆Elkington，1987；Arumuganathan＆Earl，1991）使得对控制洋葱雄性不育基因的研究显得比较困难，而一些精细的基因分析方法和更多限制性酶的出现，促进了研究者对洋葱恢复分子标记的研究。King等（1998）首先采用随机扩增多态性DNA（RAPD）和限制性片段长度多态性（RFLP）方法，以58个F3代群体为材料，对多个性状作图，将控制S型雄性不育的基因定位在B群的两个RFLP标记之间[AOB（14cM）；API65（15cM）]。这个区域被定位在第二条染色体上（Martin et a1.，2005）。(https://www.daowen.com)

由于上述分子标记所用的群体较小，使得对于恢复位点的分子标记密度小，遗传距离大，实用性不高。Gokce等（2002）又以相同的材料，较大的群体为研究对象，采用扩增片段长度多态性（AFLP）和限制性片段长度多态性（RFLP）方法对与Ms连锁的区域进行精细作图，获得了3个与Ms位点紧密连锁的具有多态性的RFLP标记，连锁距离分别为0.9、1.7和8.6cM，其中AOB272是与Ms位点最接近的RFLP标记。根据这个结果，Gökçe和Havey（2002）在两个开放授粉的洋葱群体内，以AOB272标记为辅助工具，尝试选择保持系，但发现该标记与保持系几乎没有关联。作者认为可能是因为在长久的开放授粉环境下，AOB272标记与Ms位点之间已经进行了充分的染色体交换。因此只用该分子标记无法准确地选出保持系。