4.1　bendless对于眼部过表达Egr引起的细胞死亡是必需的

与对照相比（图4-1 A），在果蝇眼部过表达Egr会诱导细胞死亡并产生小眼表型（图4-1 B），我们对果蝇基因组进行的遗传筛选发现3个互相重叠的缺失片段都能够部分抑制小眼表型（图4-1 C—E），重叠区域位于染色体12C6到12D3之间。根据已知的果蝇基因组序列，我们发现这段区域覆盖了多个基因，其中包括bendless[29]。bendless（ben）编码了果蝇体内一个E2泛素结合酶，它参与了包括逃避反应[97]，轴突生长、成熟[63]，长期记忆[98]及免疫应答[99]等一系列生理活动。我们进一步的研究表明ben的部分或全部缺失能够部分或完全（图4-1 F，G）抑制小眼表型，并且这种抑制作用可被同时再引入的外源ben基因组片段解除（图4-1 H，M）。

图4-1　Ben调控了果蝇眼部Egr过表达引起的小眼表型(https://www.daowen.com)

（A—L）果蝇成虫眼部光学显微镜照片。与对照相比（A，GMR-Gal4/+），GMR＞Egr诱导的小眼表型（B，UAS-Egr/+；GMR-Gal4/+）能够被染色体缺失片段Df（1）HA92（C，Df（1）HA92/X；UAS-Egr/+；GMR-Gal4/+），Df（1）ben CO1（D，Df（1）ben CO1/X；UAS-Egr/+；GMR-Gal4/+）及Df（1）ben CO2（E，Df（1）ben CO2/X；UAS-Egr/+；GMR-Gal4/+）所抑制。也可以被杂合体ben突变（F，ben1/X；UAS-Egr/+；GMR-Gal4/+），半合体ben突变（G，ben1/Y；UAS-Egr/+；GMRGal4/+）或过表达ben RNAi（J，UAS-Egr/+；GMR-Gal4/UAS-ben-IR）所抑制，但不会受到GFP RNAi影响（I，UAS-Egr/UAS-GFP-IR；GMR-Gal4/+）。这种抑制作用可以被ben T25（H，ben1/Y；UAS-Egr/ben T25；GMR-Gal4/ben T25；L，UAS-Egr/ben T25；GMR-Gal4/UAS-ben-IR）或者过表达Ben（K，UAS-Egr/UAS-Ben；GMR-Gal4/UAS-ben-IR）所逆转。（M）示意图中画出了ben基因，ben T25转基因及两个用于过表达Ben的P因子（EP1651和d09936）。

此外，过表达Egr引起的小眼表型也可以被ben RNAi很好地抑制（图4-1 J），却不会被表达GFP的RNAi抑制（图4-1 I）。同样的，这种ben RNAi产生的抑制效果也能被引入的外源ben基因组片段或过表达Ben所解除（图4-1 K，L）。以上实验结果充分证明ben对于果蝇眼部发育过程中Egr过表达引起的细胞死亡是必需的。