4.2 dUev1a对于眼部过表达Egr引起的细胞死亡是必需的
我们的遗传筛选结果显示还有两个紧密相邻的染色体缺失片段同时部分抑制了Egr诱导的小眼表型（图4-2 B—D），对比果蝇基因组序列后我们发现他们都覆盖了d Uev1a这个基因（图4-2 J）。本文之所以同时研究ben和d Uev1a这两个基因是因为有证据表明Ben能与d Uev1a结合形成E2泛素结合酶复合物[66，99]，进而调控了IκB/NF-κB信号通路介导的TRAF6泛素化过程[100]。为了进一步确定是否是因为这个基因的干扰影响了GMR＞Egr小眼表型，我们用了d Uev1a的突变体进行了进一步的验证，发现杂合突变体同样可以部分抑制该表型（图4-2 E），而同时突变d Uev1a两份拷贝则可以完全抑制Egr诱导的小眼表型（图4-2 F—G），尽管这些幼虫会死在较晚的期蛹，不能羽化出来。同样的抑制效果也可以通过表达d Uev1a的RNAi后观察到（图4-2 I），进一步证明d Uev1a对于Egr在眼部过表达引起的小眼表型有重要调节作用。
前人研究发现GMR＞Egr能够在眼成虫盘的形态发生沟（morphogenetic furrow）后部诱发很强的细胞死亡，可通过AO（acridine orange）染色观测到（图4-3 A—B）。我们发现这种细胞死亡被d Uev1a RNAi很好地抑制（图4-3 C），表明d Uev1a对于眼部发育过程中Egr诱发的细胞死亡也是必需的。此外，我们发现下调d Uev1a还抑制了Egr过表达引起的rpr这一凋亡促进基因[101]的活化（图4-3 D—F），进一步证明d Uev1a调控了Egr在眼部诱导的细胞死亡。
图4-2 dUev1a调控了果蝇眼部Egr过表达引起的小眼表型(https://www.daowen.com)
（A—I）与对照相比（A，GMR-Gal4/+），GMR＞Egr产生的小眼表型（B，UAS-Egr/GMR-Gal4）能被d Uev1a染色体缺失片段Df（3L）Exel6104（C，UAS-Egr/GMR-Gal4；Df（3L）Exel6104/+），Df（3L）Exel6105（D，UAS-Egr/GMR-Gal4；Df（3L）Exel6105/+）及突变杂合体（E，UAS-Egr/GMR-Gal4；d Uev1a DG14805/+）部分抑制，反式杂合子（transheterozygous）完全抑制（F，UAS-Egr/GMR-Gal4；Df（3L）Exel6104/Df（3L）Exel6104，G，UAS-Egr/GMR-Gal4；Df（3L）Exel6104/d Uev1a DG14805）。表达d Uev1a的RNAi可以（I，UAS-Egr/GMR-Gal4；UAS-d Uev1a-IR），而GFP则不能（H，UAS-Egr/GMRGal4；UAS-GFP/+）抑制Egr引起的小眼表型。（J）d Uev1a在染色体上位置示意图，开放阅读框（黑色），P因子DG14805及两个染色体缺失片段在图中被标出。
图4-3 dUev1a调控了果蝇眼部Egr过表达诱导的细胞死亡
（A—C）荧光显微镜3龄幼虫眼成虫盘AO染色图片。与对照相比（A，GMR-Gal4/+），Egr过表达引起的细胞死亡（B，UAS-Egr/GMR-Gal4；UAS-GFP/+）可以被过表达d Uev1a的RNAi所抑制（C，UAS-Egr/GMR-Gal4；UAS-d Uev1a-IR）。
（D—F）光学显微镜3龄幼虫眼成虫盘X-Gal染色图片。与对照相比（D，GMR-Gal4/+；rpr-LacZ/+），Egr过表达引起的rpr激活（E，UAS-Egr/GMR-Gal4；UASGFP/rpr-LacZ）可被过表达d Uev1a的RNAi所抑制（F，UAS-Egr/GMR-Gal4；UAS-d Uev1a-IR/rpr-LacZ）。