4.4　Ben和dUev1a调控Egr诱导的puc表达

为了研究Ben和d Uev1a调控JNK信号通路的生理学作用，我们检测了成虫盘中JNK下游报告基因puc的表达情况。前人研究发现Egr过表达能够在形态发生沟后部引起很强的puc表达[60]（图4-6 B，M），这种激活可以被下调d Uev1a（图4-6 C—E）或者ben抑制（图4-6 N）。我们进一步实验发现在翅成虫盘中沿着前后轴过表达Egr引起的puc激活同样可以被下调d Uev1a抑制（图4-6 F—J），表明Ben和d Uev1a对于Egr诱导的JNK活化也是必需的。此外，puc在形态发生沟后部的激活还可以通过加长染色时间检测到（图4-6 K），而这依赖于内源性的Egr-JNK信号通路[60]。我们发现在ben突变体中受内源性Egr调控处puc表达水平显著下降（图4-6 L，箭头下方处），相反地，那些在翅成虫盘边缘不受Egr调控部分puc表达则没有改变（图4-6 L）[60]，说明ben同时还参与发育过程中内源性Egr引起的JNK激活。

图4-5　dUev1a调控了果蝇背部及翅膀Egr过表达诱导的细胞死亡（彩图1）

（A—C，G—I）荧光显微镜3龄幼虫翅成虫盘AO染色图片。与对照相比（A和D），过表达Egr引起的背板区域细胞死亡（B）及翅成虫盘细胞死亡（H）均可以被下调d Uev1a抑制（C和I）。
（D—E）光学显微镜果蝇成体背部图片。与对照相比（D），Egr过表达引起的盾片变小表型（E）可以被d Uev1a的RNAi（F）所抑制。
（J—L）光学显微镜果蝇成体翅膀图片。与对照相比（J），Egr过表达引起的翅脉丢失（K）可以被d Uev1a的RNAi（L）所抑制。
（A，D）pnr-Gal4/+，（B，E）UAS-Egr/+；pnr-Gal4/+，（C，F）UAS-Egr/+；pnr-Gal4/UAS-d Uev1a-IR（G，J）sd-Gal4/+，（H，K）sd-Gal4/+；UASEgr/+，（I，L）sd-Gal4/+；UAS-Egr/+；UAS-d Uev1a-IR/+。(https://www.daowen.com)

图4-6　dUev1a和ben对于Egr过表达诱导的JNK活化是必需的

（A—E，K—N）幼虫眼成虫盘X-Gal染色图片。与对照相比（A，GMR-Gal4/puc E69），过表达Egr引起的puc表达（B，M，GMR-Gal4 UAS-Egr/+；puc E69/+）可被d Uev1a的突变体（C，GMR-Gal4 UAS-Egr/+；d Uev1a DG14805/puc E69），RNAi（E，GMR-Gal4 UAS-Egr/+；puc E69/UAS-d Uev1a-IR）及ben的突变体（N，ben1/Y；GMR-Gal4 UAS-Egr/+；puc E69/+）所抑制。眼成虫盘中内源puc表达（K，GMR-Gal4/puc E69/+）在ben突变体中显著降低（L，ben1/Y；GMR-Gal4/pucE69）。
（F—J）光学显微镜3龄幼虫翅成虫盘X-Gal染色图片。与对照相比（F，ptc-Gal4/+；puc E69/+），翅成虫盘过表达Egr引起的puc激活（G，ptc-Gal4 UAS-Egr/+；puc E69/+）可以被d Uev1a的突变体（H，ptc-Gal4 UAS-Egr/+；d Uev1aDG14805/pucE69），RNAi（J，ptc-Gal4 UAS-Egr/+；puc E69/UAS-d Uev1a-IR）抑制，却不会受过表达GFP影响（I，ptc-Gal4 UAS-Egr/+；puc E69/UAS-GFP）。