4.5　Ben通过dTRAF2调控JNK信号通路

接下来为了将Ben在JNK通路上进行遗传学定位，我们检测了Ben与d TAK1或Hep之间的上下游关系。在sevenless（sev）启动子作用下过表达d TAK1或持续激活型的Hep（Hep CA）能够在眼成虫盘中引起很强的细胞死亡并产生粗糙的小眼表型（图4-7 A，C）[65，102]。这些表型可以被下调bsk所抑制，但却不会被ben基因的突变所影响（图4-7 B，D），表明在Egr-JNK信号通路中，Ben位于d TAK1和Hep的上游。

与此相符的是，我们发现在eyeless（ey）启动子驱使下过表达Ben产生了与JNK信号通路上调类似的小眼表型（图4-7 E），而这个表型能被d TRAF2及d TAK1的缺失抑制（图4-7 G，H），却不会被weagen（wgn）的下调抑制（图4-7 F）。我们又用不同的组织对此上位性关系进行了进一步的验证，发现在胸背部过表达Ben产生的盾片变小表型同样可以被d TRAF2及d TAK1的缺失，而不是weagen（wgn）的下调所抑制（图4-7 I—L）。以上遗传学上下游证据表明Ben对于JNK信号通路的调控是位于d TRAF2的上游及Wgn的下游。

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图4-7　Ben通过d TRAF2调控JNK信号通路

（A—H）果蝇成虫眼部光学显微镜照片。在sev启动子调控下过表达d TAK1（A，sev-Gal4 UAS-d TAK1/+）或持续激活型Hep（C，sev-Gal4 UAS-Hep CA/+）引起的粗糙小眼表型不能被ben的突变体抑制（分别为B，ben1；sev-Gal4 UAS-d TAK1/+和D，ben1；sev-Gal4 UAS-Hep CA/+）。在ey启动子调控下过表达Ben产生的粗糙小眼表型（E，bend09936/Y；ey-Gal4/+）可被d TRAF2的突变体（G，d TRAF2EXbend09936/Y；ey-Gal4/+）或过表达d TAK1 RNAi（H，bend09936/Y；ey-Gal4/UAS-d TAK1-IR）所抑制，但不会因wgn的下调而改变（F，ben d09936/Y；ey-Gal4/UAS-wgn-IR）。
（I—L）光学显微镜果蝇成体背部图片。Ben过表达引起的盾片变小表型（I，ben EP1651/Y；pnr-Gal4/+）可以被d TRAF2的突变体（J，d TRAF2EX1ben EP1651/Y；pnr-Gal4/+）或过表达d TAK1 RNAi（K，ben EP1651/Y；pnr-Gal4/UAS-d TAK1-IR）所抑制，同样不会因wgn的下调而改变（L，ben EP1651/Y；pnr-Gal4/UAS-wgn-IR）。