4.8　Ben/dUev1a调控Ras-lgl诱导的肿瘤生长及迁移

许田等人发现利用ey Flp/MARCM系统在眼-触角成虫盘中突变细胞极性基因lgl（lethal giant larvae）的同时过表达持续活化型癌基因Ras（RasV12）能够协同诱导肿瘤生长（图4-10 A），并且这些肿瘤细胞会向腹部神经节产生JNK信号通路依赖的迁移表型（图4-10 A′，D′）[17，39]。我们前面的实验结果表明Ben和d Uev1a调控了JNK通路介导的细胞死亡，那它们是否也参与了lgl-Ras诱导的肿瘤生长与迁移的调控呢？于是我们进行了验证，发现过表达ben RNAi不但完全抑制了肿瘤细胞向腹部神经节的侵袭（图4-10 B′），还很好地阻断了肿瘤的发生（图4-10 B）。与之前用GMR＞Egr筛选得到的实验结果类似，我们发现ben杂合突变体只能部分抑制肿瘤生长及迁移（图4-10 C）。

我们对d Uev1a的检测也得到了类似的结果。过表达d Uev1a RNAi能够显著地抑制肿瘤生长及迁移（图4-10 E），而杂合突变体能部分抑制肿瘤的迁移（图4-10 F′），但对肿瘤生长并无明显抑制效果（图4-10 F），这与之前检测细胞死亡时得到的结果相同。而同时下调ben和d Uev1a则可以完全抑制肿瘤的生长及迁移（未显示）。此外，我们还发现下调d Uev1a或者ben均能够显著性地抑制lgl-Ras诱导的JNK磷酸化水平上调（图4-10 G，H，未显示）。

以上实验结果说明Ben和d Uev1a通过调节JNK信号通路影响了发育过程中lgl-Ras协同作用下诱导的肿瘤发生及肿瘤细胞迁移。(https://www.daowen.com)

图4-10　Ben/dUev1a调控Ras-lgl诱导的肿瘤发生及迁移（见彩图3）

（A—F）荧光显微镜3龄幼虫眼成虫盘及腹部神经节（VNC）图片，GFP标记克隆。Ras V12/lgl-/-诱导的肿瘤生长（A）及向VNC的侵袭（A′）可以被ben下调（B，C），d Uev1a下调（E，F）及过表达Puc（D）所抑制。（百分比：抑制肿瘤细胞迁移的比例）
（G—H）荧光显微镜3龄幼虫眼成虫盘抗体免疫染色图片。Ras V12/lgl-/-诱导的JNK磷酸化上调（G）可被过表达d Uev1a RNAi显著抑制（H）。
（A，G）y，w，ey-Flp/+；tub-Gal80，FRT40A/lgl4FRT40A UAS-Ras V12；Act＞y+＞Gal4，UAS-GFP/+.（B）y，w，ey-Flp/+；tub-Gal80，FRT40A/lgl4FRT40A UAS-Ras V12；Act＞y+＞Gal4，UAS-GFP/UAS-ben-IR.（C）y，w，ey-Flp/ben1；tub-Gal80，FRT40A/lgl4FRT40A UAS-Ras V12；Act＞y+＞Gal4，UAS-GFP/+.（D）y，w，ey-Flp/+；tub-Gal80，FRT40A/lgl4FRT40A UAS-Ras V12；Act＞y+＞Gal4，UAS-GFP/UAS-Puc.（E，H）y，w，ey-Flp/+；tub-Gal80，FRT40A/lgl4FRT40A UAS-Ras V12；Act＞y+＞Gal4，UAS-GFP/UAS-d Uev1a-IR.（F）y，w，ey-Flp/+；tub-Gal80，FRT40A/lgl4FRT40A UAS-Ras V12；Act＞y+＞Gal4，UAS-GFP/d Uev1a DG14805。