4.7　Ben能够促进dTRAF2多聚泛素化

为了研究Ben能否与d TRAF2在体内相互作用，我们检测了两者在眼成虫盘中的亚细胞定位情况。免疫荧光显示Ben与d TRAF2在形态发生沟后部能很好地共定位（图4-9 A—F）。此外，体内免疫共沉淀的实验结果显示表达的Flag-d TRAF2能与内源的Ben（4.9 G，第2列）以及过表达的Ben（图4-9 G，第3列）结合。并且，Ben与d TRAF2的结合是特异性地，因为内源性的或过表达的Ben都不能与另外一个E3连接酶——Parkin[103]发生相互作用（图4-9 H）。

之前的研究结果报道TNF能够诱导TRAF2/6在第63位赖氨酸（K63）的多聚泛素化修饰[104]，这种修饰不会使蛋白底物降解，而是促进下游信号分子的激活[105]。与此相符的是，我们发现过表达Egr能诱导d TRAF2多聚泛素化发生（图4-9 I，上图第3列），但不会对蛋白稳定性造成影响（图4-9 I，中图第3列）。下调ben表达能够抑制Egr诱导的d TRAF2发生（图4-9 I，上图第4列）；而反之，过表达Ben则能够促进d TRAF2多聚泛素化发生（图4-9 I，上图第5列），同样没有改变d TRAF2蛋白的稳定性（图4-9 I，中图第5列）。以上实验结果表明Ben对于Egr诱导的d TRAF2多聚泛素化的调控既是必要的也是充分的。

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图4-9　Ben能与dTRAF2相互作用并调控其多聚泛素化（见彩图2）

（A—F）荧光显微镜3龄幼虫眼成虫盘抗体免疫染色图片。Ben（绿色）能与d TRAF2（红色，通过Flag显示）在膜上共定位，D，E，F分别为A，B，C的放大图。
（G）d TRAF2能与内源性的以及过表达的Ben在体内相互作用，免疫共沉淀的实验材料来自果蝇眼成虫盘。（H）Park不能与Ben在体内相互作用，免疫共沉淀的实验材料来自果蝇眼成虫盘。（I）Egr过表达诱导的d TRAF2多聚泛素化依赖于ben，而过表达Ben则能够诱导d TRAF2多聚泛素发生，以上改变均不会对d TRAF2蛋白的稳定性造成影响。